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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 淀粉酶的吸光度
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swqowen

金虫 (职业作家)

勋章归天

[求助] 淀粉酶的吸光度

按照国标法做测试淀粉酶的活性，可是每次到最后的反应液加入稀释成的碘液和盐酸失活时里立马颜色变成黑紫色，吸光度根本没发测试！开始以为是酶的浓度太高（稀释100倍（后来稀释10000倍还是那样，谁做过这方面的，请教一下，是不是淀粉过期了（可溶性淀粉都是先配先做的）还是其他什么问题？
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1楼 2011-05-30 13:25:31
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
amisking(金币+1): 鼓励应助 2011-05-30 19:49:39
国标法是怎么样的，是碘法？碘液的浓度呢？淀粉酶是怎么得来的，现在是什么保存状态，怎么个用法？淀粉溶液是怎样的？盐酸怎么用？整个测定体系是怎样的？
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2011-05-30 16:33:44
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
还没完全回答，说不定哪里出错了，不详细就找不出来
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7楼2011-05-30 17:19:51
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+10, EPI+1): 谢谢热心回复 2011-07-25 00:39:19
scelab(金币+10, EPI+1): 谢谢热心回复 2011-07-25 00:40:34
scelab(MicEPI-1): 系统出问题，去掉一个吧 2011-07-25 11:49:02
我提一些问题给你思考一下，你有兴趣可以做一下问题里面的相关实验。

一、        淀粉酶在70度下反应是不是会失活？我有的淀粉酶最适作用温度是35度的，70度一放就失活。你试过你的淀粉酶在70度的半衰期了没？
二、        pH6.0的缓冲液才5毫升，总体积是26毫升，你测定过加进去之后pH值还是不是6.0没有？
三、        酶活力的定义是国际单位还是别人自己瞎搞的单位？单位不同，酶活力数值有可能相差一千倍。
四、1毫升反应液与0.5毫升0.1M的盐酸混合之后pH值为多少？你的淀粉酶会不会失活？
五、碘液浓度多少？浓度大，就能超过Yoo法的测定范围，Yoo法只能测到0.7。
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11楼2011-05-30 19:12:49
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
无论是内切还是外切酶都可以用DNS法，操作也方便。至于内切酶，假如要以底物淀粉的消耗来计算酶活力，那就最好用碘法，你想用哪种？
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13楼2011-05-30 21:41:50
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
我也怀疑测酶活力的时候有些偏差，所以才提了那些问题。

碘法我是自己优化过的，很精确，都可以用来测定内切酶的最适作用温度了，梯度为5度的。
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16楼2011-05-31 18:44:53
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
我怀疑用DNS法还简单，碘法太麻烦，要不是我想测我还不想用呢，你还是看看DNS法的好，真的很方便的。
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18楼2011-05-31 19:25:17
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+5): 谢谢热心回复 2011-07-25 00:40:34
每升含有：
四水合酒石酸钾钠200克
氢氧化钠20克
无水亚硫酸钠0.5克
DNS10克
结晶酚2克
配置好后暗处静置一周才可用

配置所需要pH值含有可溶性淀粉的0.1M柠檬酸-0.2M磷酸氢二钠缓冲液，取0.45毫升与0.05毫升淀粉酶溶液混匀，达到反应时间后加入1毫升DNS试剂，沸水浴5分钟显色。
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20楼2011-06-01 21:49:24
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
不知道楼主做得怎样了，DNS法很好做的，应该做得很好了。楼主的问题明显是淀粉残留得太多。
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23楼2011-07-25 00:32:13
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
这就对了，一个半月的时间足够了。
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25楼2011-07-25 16:59:02
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