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zboter银虫 (正式写手)
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【求助/交流】做淀粉酶的请进 有奖 已有2人参与
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我是刚做淀粉酶的，克隆表达了一段淀粉酶基因后，SDS-PAGE发现有目的蛋白表达，但是在测酶活的时候发现，当我把细胞破碎液加紧底物后，蛋白就会和淀粉共沉淀，请问这是怎么回事，如何解决?（胞内酶） 酶活测定方法：取10 mL 1%的马铃薯淀粉溶液(pH 4.0)放入一支试管内，于40 ℃预热10 min后，加入1 mL的发酵酶液，摇匀，精确保温10 min。用移液管吸取1 mL反应液置于盛有10 mL、0.1 mol/L HCl的试管中，再取0.5 mL混合液体于盛有10 mL碘液的试管中，摇匀，并立即用分光光度计于660 nm处测定吸光度。用同样方法测定空白值，但不加发酵液，而带之以1.0 mL的蒸馏水。以蒸馏水作为参比液。 酶活定义：1个酸性α-淀粉酶单位相当于在pH 4.0，温度40 ℃，1 min将浓度为1%的马铃薯淀粉溶液的显蓝强度降低1%时所需酶量。 |
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