应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】做淀粉酶的请进 有奖
71/1返回列表
查看: 1147  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zboter

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】做淀粉酶的请进 有奖 已有2人参与

我是刚做淀粉酶的，克隆表达了一段淀粉酶基因后，SDS-PAGE发现有目的蛋白表达，但是在测酶活的时候发现，当我把细胞破碎液加紧底物后，蛋白就会和淀粉共沉淀，请问这是怎么回事，如何解决?（胞内酶）
     酶活测定方法：取10 mL 1%的马铃薯淀粉溶液(pH 4.0)放入一支试管内，于40 ℃预热10 min后，加入1 mL的发酵酶液，摇匀，精确保温10 min。用移液管吸取1 mL反应液置于盛有10 mL、0.1 mol/L HCl的试管中，再取0.5 mL混合液体于盛有10 mL碘液的试管中，摇匀，并立即用分光光度计于660 nm处测定吸光度。用同样方法测定空白值，但不加发酵液，而带之以1.0 mL的蒸馏水。以蒸馏水作为参比液。
    酶活定义：1个酸性α-淀粉酶单位相当于在pH 4.0，温度40 ℃，1 min将浓度为1%的马铃薯淀粉溶液的显蓝强度降低1%时所需酶量。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-07-01 16:31:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
zboter(金币+1): 2010-07-02 13:53:25
生淀粉酶我没做过，不好意思，猜测是生淀粉酶吸附生淀粉，生淀粉是晶体结构，只有能吸附才能降解的。为什么要破碎细胞，淀粉酶几乎都是胞外酶的，为了方便纯化？
赞一下 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2010-07-01 17:21:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zboter

银虫 (正式写手)
我是克隆的外源基因，在大肠中表达的，所以说是胞内酶，你从哪看看出是生淀粉酶啊?老产生沉淀，这个酶活该怎么测呢？
赞一下 回复此楼
3楼2010-07-02 13:56:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★
看天(金币+2):鼓励交流 2010-07-02 14:48:23
zboter(金币+1): 2010-07-03 20:37:11
会沉淀的淀粉难道是熟淀粉？把马铃薯淀粉粉碎过80目筛之后放到水里是绝对沉淀的。难道楼主将淀粉糊化后不液化就直接作为底物？为了方便收集酶液，克隆的时候去掉信号肽是很正常的，但有的淀粉酶基因有结合域，就要看楼主克隆的基因里有没有了。
赞一下(1人) 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2010-07-02 14:46:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zboter

银虫 (正式写手)
楼主可否发个qq仔细询问一下？我有好多不懂的。
赞一下 回复此楼
5楼2010-07-03 20:38:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zboter

银虫 (正式写手)
我测酶活用的是熟淀粉，是经过糊化的，但是加进我要测得酶液后，就产生了沉淀。
赞一下 回复此楼
6楼2010-07-03 21:10:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

影幽草

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主在么？我想问下酶活定义的问题

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
7楼2017-02-16 19:53:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zboter 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 284求调剂 +3 天下熯 2026-03-02 3/150 2026-03-02 18:15 by lature00
[考研] 283求调剂 +3 鹿沫笙 2026-03-02 3/150 2026-03-02 18:10 by barlinike
[考研] 化学，材料，环境类求调剂 +5 考研版棒棒 2026-03-02 5/250 2026-03-02 18:07 by lature00
[考研] 289求调剂 +6 yang婷 2026-03-02 6/300 2026-03-02 18:05 by 无际的草原
[考研] 环境调剂 +3 chenhanheng 2026-03-02 3/150 2026-03-02 17:37 by houyaoxu
[考研] 接收调剂 +5 津萌津萌 2026-03-02 12/600 2026-03-02 17:04 by 津萌津萌
[考研] 材料化工调剂 +12 今夏不夏 2026-03-01 14/700 2026-03-02 16:09 by 今夏不夏
[考研] 求调剂 +9 yunziaaaaa 2026-03-01 10/500 2026-03-02 15:18 by 半截的诗0927
[考研] 290分材料工程085601求调剂 数二英一 +3 llx0610 2026-03-02 3/150 2026-03-02 14:15 by yc258
[考研] 26考研报考西工大材料308分求调剂 +4 weizhong123 2026-03-01 4/200 2026-03-02 12:46 by 无际的草原
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +6 礼堂丁真258 2026-02-28 9/450 2026-03-02 12:04 by 52hz~~
[考研] 材料工程专硕283求调剂 5+4 ，！？ 2026-03-02 6/300 2026-03-02 11:07 by 黑！在干嘛
[基金申请] 成果系统访问量大，请一小时后再尝试。---NSFC啥时候好哦，已经两天这样了 +4 NSFC2026我来了 2026-02-28 4/200 2026-03-01 22:37 by 铁门栓
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +4 15779376950 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:00 by Fff-1
[考研] 328求调剂 +3 aaadim 2026-03-01 5/250 2026-03-01 17:29 by njzyff
[基金申请] 刚录用，没有期刊号，但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 298求调剂 +9 人间唯你是清欢 2026-02-28 12/600 2026-03-01 14:23 by Ducount.Y
[考研] 302材料工程求调剂 +4 Doleres 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:52 by liqiongjy
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭