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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 淀粉酶的吸光度
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+10, EPI+1): 谢谢热心回复 2011-07-25 00:39:19
scelab(金币+10, EPI+1): 谢谢热心回复 2011-07-25 00:40:34
scelab(MicEPI-1): 系统出问题，去掉一个吧 2011-07-25 11:49:02
我提一些问题给你思考一下，你有兴趣可以做一下问题里面的相关实验。

一、        淀粉酶在70度下反应是不是会失活？我有的淀粉酶最适作用温度是35度的，70度一放就失活。你试过你的淀粉酶在70度的半衰期了没？
二、        pH6.0的缓冲液才5毫升，总体积是26毫升，你测定过加进去之后pH值还是不是6.0没有？
三、        酶活力的定义是国际单位还是别人自己瞎搞的单位？单位不同，酶活力数值有可能相差一千倍。
四、1毫升反应液与0.5毫升0.1M的盐酸混合之后pH值为多少？你的淀粉酶会不会失活？
五、碘液浓度多少？浓度大，就能超过Yoo法的测定范围，Yoo法只能测到0.7。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
11楼2011-05-30 19:12:49
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swqowen

金虫 (职业作家)

勋章归天
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-05-30 19:12:49:
我提一些问题给你思考一下，你有兴趣可以做一下问题里面的相关实验。

一、        淀粉酶在70度下反应是不是会失活？我有的淀粉酶最适作用温度是35度的，70度一放就失活。你试过你的淀粉酶在70度的半衰期了没？
二、 ...

学长，那你的中温淀粉酶的活性是怎么测试的，求教？能发一个方案吗？谢谢了！
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12楼2011-05-30 20:54:09
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
无论是内切还是外切酶都可以用DNS法，操作也方便。至于内切酶，假如要以底物淀粉的消耗来计算酶活力，那就最好用碘法，你想用哪种？
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13楼2011-05-30 21:41:50
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swqowen

金虫 (职业作家)

勋章归天
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-05-30 21:41:50:
无论是内切还是外切酶都可以用DNS法，操作也方便。至于内切酶，假如要以底物淀粉的消耗来计算酶活力，那就最好用碘法，你想用哪种？

DNS法测试会不会有误差，和碘法相比。如果想用碘法，具体的方案有吗？
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14楼2011-05-31 09:17:06
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jianqihb

金虫 (初入文坛)
你说的国标法 请给下国标编号
中温淀粉酶我们是60度测的 （不是国标） 有一个轻工部的标准是真菌阿尔法淀粉酶 40度测的
你一直都是黑紫色 可能淀粉还没有被分解  你要确定酶活有的吗?
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15楼2011-05-31 16:48:04
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
我也怀疑测酶活力的时候有些偏差，所以才提了那些问题。

碘法我是自己优化过的，很精确，都可以用来测定内切酶的最适作用温度了，梯度为5度的。
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16楼2011-05-31 18:44:53
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swqowen

金虫 (职业作家)

勋章归天
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-05-31 18:44:53:
我也怀疑测酶活力的时候有些偏差，所以才提了那些问题。

碘法我是自己优化过的，很精确，都可以用来测定内切酶的最适作用温度了，梯度为5度的。

学长你能告诉我你的方案吗？我怀疑是不是设计的方案有问题，今天又做了1次，在40°的水浴中，最后反应液还是出现蓝色，到最后变得特别浓，吸光度又大于1了，跪求学长的方案，看看你的优化碘法！
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17楼2011-05-31 19:04:08
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
我怀疑用DNS法还简单，碘法太麻烦，要不是我想测我还不想用呢，你还是看看DNS法的好，真的很方便的。
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18楼2011-05-31 19:25:17
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swqowen

金虫 (职业作家)

勋章归天
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-05-31 19:25:17:
我怀疑用DNS法还简单，碘法太麻烦，要不是我想测我还不想用呢，你还是看看DNS法的好，真的很方便的。

学长，有没有DNS法测试淀粉酶的相关文献，我做做看看！
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19楼2011-05-31 19:35:28
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+5): 谢谢热心回复 2011-07-25 00:40:34
每升含有：
四水合酒石酸钾钠200克
氢氧化钠20克
无水亚硫酸钠0.5克
DNS10克
结晶酚2克
配置好后暗处静置一周才可用

配置所需要pH值含有可溶性淀粉的0.1M柠檬酸-0.2M磷酸氢二钠缓冲液，取0.45毫升与0.05毫升淀粉酶溶液混匀，达到反应时间后加入1毫升DNS试剂，沸水浴5分钟显色。
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20楼2011-06-01 21:49:24
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