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swqowen

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[求助] 淀粉酶的吸光度

按照国标法做测试淀粉酶的活性，可是每次到最后的反应液加入稀释成的碘液和盐酸失活时里立马颜色变成黑紫色，吸光度根本没发测试！开始以为是酶的浓度太高（稀释100倍（后来稀释10000倍还是那样，谁做过这方面的，请教一下，是不是淀粉过期了（可溶性淀粉都是先配先做的）还是其他什么问题？

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1楼 2011-05-30 13:25:31

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swqowen

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引用回帖:

Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-05-30 17:19:51:
还没完全回答，说不定哪里出错了，不详细就找不出来

空白试验方法：准确吸取20ml 2%可溶性淀粉溶液，置人50ml比色管中．加5ml pH6．0缓冲溶液，摇匀．于7OC水浴预热5min，准确加入lml稀释酶液(酶活力为每毫升60-100单位为宜)，立即计时，摇匀，于70C水浴准确保温酶解反应5min，立即取出1ml反应液，置^含有0，5ml 0．1mol／L盐酸溶液中终止酶解反应，加入5ml稀碘液，摇匀以稀碘液为空白，lcm比色皿，660nm波长下测吸光度【A)，查酶浓度(c)与吸光度(A)对照表，求得酶浓度，再乘以稀释倍数即为被测酶样活力。测试四次取平均值.这是设计的空白试验方案，但每次颜色都显示黑色。