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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA测序求助
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lihongyeer

金虫 (正式写手)

[求助] DNA测序求助

想通过16s rDNA来对微生物进行鉴定，但测序公司回复说：“您的样品（12株）的1492R向    的测序结果出现了重叠峰，测序失败，这有可能是您的模板存在污染，或是由于引物与模板的结合性不单一，导致扩增过程中有大小相近的非特异性条带杂片段产生，而琼脂糖回收无法分离这样的片段所致，建议您改进实验条件重新提供样品”
菌株我是通过四轮分离纯化的，应该不会全部污染，引物我用的是通用引物1492r和27f，DNA提取使用的天根生化的细菌基因组DNA提取试剂盒，请问各位有经验的虫友，现在该怎么做？
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Strivetomakeeverydayjoyfulandmeaningful！
1楼 2011-05-18 15:17:11
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xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~！
克隆测序呗。。。
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4楼2011-05-18 21:53:12
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): good 2011-05-18 19:16:34
lihongyeer(金币+5): 多谢建议 2011-05-18 19:18:27
用的是通用引物，PCR只要污染一点其他的模板就会出现重叠峰的，不需要全部污染。
菌株进一步分离纯化再做PCR，或者重新PCR送样。
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2楼2011-05-18 18:42:53
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lihongyeer

金虫 (正式写手)
好大的一项工程哇
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Strivetomakeeverydayjoyfulandmeaningful！
3楼2011-05-18 21:18:29
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太极拳

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

lihongyeer(金币+1): 2011-06-10 16:04:19
由于是通用引物产物同源性太高，所以楼主需要筛片段。连载体筛单斑
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5楼2011-05-23 00:00:06
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