| 查看: 1356 | 回复: 6 | ||
lihongyeer金虫 (正式写手)
|
[求助]
DNA测序求助
|
|
想通过16s rDNA来对微生物进行鉴定，但测序公司回复说：“您的样品（12株）的1492R向 的测序结果出现了重叠峰，测序失败，这有可能是您的模板存在污染，或是由于引物与模板的结合性不单一，导致扩增过程中有大小相近的非特异性条带杂片段产生，而琼脂糖回收无法分离这样的片段所致，建议您改进实验条件重新提供样品” 菌株我是通过四轮分离纯化的，应该不会全部污染，引物我用的是通用引物1492r和27f，DNA提取使用的天根生化的细菌基因组DNA提取试剂盒，请问各位有经验的虫友，现在该怎么做？ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有275人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助 高通量测序
已经有3人回复
- DNA测序求助
已经有12人回复
- 【求助】【急】请问有谁做过细胞核STR分型检测和线粒体DNA测序？急求详细方法！
已经有15人回复
- 【求助/交流】国内DNA测序研究概况
已经有10人回复
- 【求助/交流】DNA测序方法及原理求助
已经有4人回复
- 【求助/交流】国内基因测序外包CRO公司发展前景
已经有14人回复
- 【求助/交流】细菌污染对真菌提取DNA有影响么？
已经有3人回复
- 【求助/交流】请教有关DNA测序问题，请高手不吝赐教，万分感激
已经有10人回复
- 【求助/交流】第一、第二代基因测序技术
已经有7人回复
- 【求助/交流】基因测序结果分析问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】真菌提取基因组DNA的方法
已经有7人回复
- 【求助/交流】真菌的基因克隆与表达
已经有7人回复
lxj341401
至尊木虫 (著名写手)
- MolEPI: 58
- 应助: 388 (硕士)
- 贵宾: 0.238
- 金币: 17138.7
- 红花: 43
- 帖子: 2251
- 在线: 712.4小时
- 虫号: 111074
- 注册: 2005-11-20
- 专业: 生物化学
2楼2011-05-18 18:42:53
lihongyeer
金虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 983.2
- 散金: 1863
- 红花: 4
- 帖子: 572
- 在线: 494.4小时
- 虫号: 444801
- 注册: 2007-10-27
- 性别: GG
- 专业: 环境污染化学
3楼2011-05-18 21:18:29
xp198766
铁杆木虫 (著名写手)
小木虫职业打酱油滴~~！
- MolEPI: 1
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 6525.1
- 散金: 262
- 红花: 25
- 帖子: 2193
- 在线: 554小时
- 虫号: 1046859
- 注册: 2010-06-24
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
4楼2011-05-18 21:53:12
5楼2011-05-23 00:00:06
疯狂修行者
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 7
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 3121.2
- 散金: 753
- 红花: 8
- 帖子: 721
- 在线: 111.2小时
- 虫号: 332393
- 注册: 2007-03-26
- 性别: GG
- 专业: 农业昆虫学
【答案】应助回帖
lihongyeer(金币+20): 多谢多谢！ 2011-05-23 15:38:38
|
（1）换家公司，重新做PCR，回收后，送别家测序公司。公司测序，特别是PCR产物直接测序，经常会搞错的。不一定是他说的什么产物污染，出现大小相同的片段，跟测序手法也有关系的。出现大小相同的片段的概率很小的！或者在送这个公司，他可能会给你不同结果。 （2）连接T载体，现在T载体连接很好做的，好多公司出的简便的T载体，几个小时就连好，过夜后，筛斑，很快很简单。但是如果真的出现小相同的片段，那一定要挑取单菌落，这个很重要，而且最好多挑几个克隆，送测序。 （3）把自己的菌株在纯化，在活化，细菌DNA可以不用提取，直接加在PCR反应体系里就行，不用什么试剂盒，浪费。 （4）换其他16srDNA引物，这个文献里有，不难搞。 （先按第一条去弄，不行了，在弄下面的，很有可能就是公司没搞定，给你找借口呢，不用担心，不难搞） 祝你实验顺利！！ |
6楼2011-05-23 09:21:51
7楼2015-07-07 09:40:50
20