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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒单酶切出现两条带
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bla2009

铜虫 (小有名气)

[求助] 质粒单酶切出现两条带

我的质粒是pGBKT7, 上面有EcoRI, BamHI,两个酶切位点，我分别单酶切，却跑出了两条带；另外这两个酶切位点是挨着的，中间只隔了几个碱基，可是我用这两个酶进行双酶切，却也跑出了两条带，这是怎么回事啊，高手请赐教。
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等笨笨
1楼 2011-04-29 16:04:03
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-04-29 23:42:28
bla2009(金币+1): 2011-05-04 23:20:21
1：看看你的这个载体上面到底有几个EcoRI 和BamHI酶切位点；
2：按照你说的，两个酶，各单酶切居然有两条带，说明载体上这两个酶切位点各有两个；
3：你后面又说双酶切也是两条带，我感觉又有些矛盾了

所以你先看看质粒的图谱。。。
能不能将你的电泳图传上来看看呢？
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
6楼2011-04-29 22:13:57
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liby

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-04-29 23:42:11
bla2009(金币+1): 2011-05-05 08:35:21
是不是根本没有切开，
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-04-29 17:12:31
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bla2009

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by liby at 2011-04-29 17:12:31:
是不是根本没有切开，

应该不会啊，因为有时候条带正常，有时候又不正常
赞一下 回复此楼
等笨笨
3楼2011-04-29 18:02:18
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zlu520

至尊木虫 (职业作家)

限制人

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-04-29 23:41:55
bla2009(金币+1): 2011-05-05 08:35:43
同时用两种酶酶切时应该控制好两种酶的最适合pH，否则酶切会不完全的。或则分别酶切。
赞一下(1人) 回复此楼
无完人！
4楼2011-04-29 19:03:36
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查看全部 19 个回答
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