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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » western 结果和 RACE结果不一致
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lys0704

银虫 (著名写手)

[求助] western 结果和 RACE结果不一致

我预测的基因编码的蛋白大小加上信号肽只有9K，RACE证明我的预测是对的，但利用原核表达的蛋白（以证明有活性）制备的多抗做western ，发现在30KD大小的位置有一条明显的主带，9kd的地方没有条带。很是不解，请各位老师同学多多提宝贵意见。
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服务大众
1楼 2011-04-24 21:44:17
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shaquila

金虫 (正式写手)
楼主预测的CDS就是9K吗
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2楼2011-04-24 22:18:26
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lys0704

银虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by shaquila at 2011-04-24 22:18:26:
楼主预测的CDS就是9K吗

是啊
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服务大众
3楼2011-04-24 22:47:19
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lys0704

银虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by shaquila at 2011-04-24 22:18:26:
楼主预测的CDS就是9K吗

我做了全长克隆，以证明该基因只有这么大，请教
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服务大众
4楼2011-04-24 22:51:07
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shaquila

金虫 (正式写手)
★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-06-10 11:13:09
这方面没多少经验，不敢妄下结论，尝试分析下，抛砖引玉。抗体的特异性是否可以，也许你的蛋白表达丰度不高，全都杂到同源蛋白上。也可能是该蛋白多以多聚体形态存在。
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5楼2011-04-25 08:31:56
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lys0704

银虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by shaquila at 2011-04-25 08:31:56:
这方面没多少经验，不敢妄下结论，尝试分析下，抛砖引玉。抗体的特异性是否可以，也许你的蛋白表达丰度不高，全都杂到同源蛋白上。也可能是该蛋白多以多聚体形态存在。

我用原核表达的这两个蛋白，确实存在多聚体，且主要以二聚体存在，但WESTERN 结果有30KD,我该怎样去鉴定该条带是多聚体还是和其他蛋白相互作用的复合体啊，或者其他可能
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服务大众
6楼2011-04-25 08:58:12
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