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321wangke321

金虫 (正式写手)

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[交流] 10ul定量体系

求SYBR定量10ul体系的具体配置，谢谢了，实验室都是25ul的？可不可以直接根据25ul体系按比例来配置？

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1楼 2011-04-19 15:41:51

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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
amisking(金币+5, EPI+1): 支持原创。 2011-04-23 18:02:25

引用回帖:

Originally posted by 321wangke321 at 2011-04-19 15:41:51:
求SYBR定量10ul体系的具体配置，谢谢了，实验室都是25ul的？可不可以直接根据25ul体系按比例来配置？

可以的，很多实验室为了省成本都这么做。试剂厂商出于盈利目的，一般会建议20ul或25ul的体系，实际上10ul体系也能做的。我用Takara的是这么做的：

SYBR Premix Ex Taq(2X,+ROX) 5 μL
Forward Primer (2 μM)                1 μL
Reverse Primer (2 μM)                1 μL
cDNA Template                   (<500 ng)
H2O                                     to 10 μL

cDNA作模板的话，其量小于对应500ng的RNA。引物稀释成2 μM是为了加样方便，太浓的引物要小体积，不好加。

这体系我用很久了，没问题！

[ Last edited by 西瓜 on 2011-4-23 at 15:36 ]