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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 10ul定量体系
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321wangke321

金虫 (正式写手)

[交流] 10ul定量体系

求SYBR定量10ul体系的具体配置，谢谢了，实验室都是25ul的？可不可以直接根据25ul体系按比例来配置？
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1楼 2011-04-19 15:41:51
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mamadexiao

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
321wangke321(金币+5): 2011-04-23 20:11:09
5ul SYBG MIX
PRIMERs:F/R:0.5ul
cDNA(5ug反转的话)0.2ul
ddH2O:3.8ul
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2楼2011-04-22 22:38:19
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
amisking(金币+5, EPI+1): 支持原创。 2011-04-23 18:02:25
引用回帖:
Originally posted by 321wangke321 at 2011-04-19 15:41:51:
求SYBR定量10ul体系的具体配置，谢谢了，实验室都是25ul的？可不可以直接根据25ul体系按比例来配置？

可以的，很多实验室为了省成本都这么做。试剂厂商出于盈利目的，一般会建议20ul或25ul的体系，实际上10ul体系也能做的。我用Takara的是这么做的：

SYBR Premix Ex Taq(2X,+ROX)    5 μL
Forward Primer (2 μM)                  1 μL
Reverse Primer (2 μM)                  1 μL
cDNA Template                     (<500 ng)         
H2O                                       to 10 μL

cDNA作模板的话，其量小于对应500ng的RNA。引物稀释成2 μM是为了加样方便，太浓的引物要小体积，不好加。

这体系我用很久了，没问题！

[ Last edited by 西瓜 on 2011-4-23 at 15:36 ]
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3楼2011-04-23 15:34:25
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