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酶连之后如何检测？
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电泳检测的话，图谱应该是什么样子的？ 因为酶连之后做转化一直长不出来，所以在电转之前把酶连产物跑了电泳，电泳图谱类似于酶切之后的图谱。不是应该是连在载体上了吗？这个时候的质粒载体是什么状态呢？超螺旋，还是松弛闭环？ 我电转时也电了 质粒载体，当时切完载体并没有割胶回收，而是直接用来酶连了，这样也不会一点都不长吧？我电的质粒载体也没有长。。。。 求解答啊！！~~！！  |
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3楼2011-04-18 17:25:17
roomofxw
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2楼2011-04-18 17:17:09
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): good 2011-04-18 18:45:00
starfishfly(金币+1): 酶切产物没有做割胶回收，但是有重沉，这样的话也是不受离子的影响的吧。第一次转化是转化出来的，这次不知道怎么就是长不了了。条件是一样的，只是用的限制性内切酶不同。 2011-04-21 10:19:07
dhd997(金币+5): good 2011-04-18 18:45:00
starfishfly(金币+1): 酶切产物没有做割胶回收，但是有重沉，这样的话也是不受离子的影响的吧。第一次转化是转化出来的，这次不知道怎么就是长不了了。条件是一样的，只是用的限制性内切酶不同。 2011-04-21 10:19:07
| 如果你的连接效率还可以的话，连接液跑电泳，应该是三条带，一个载体，一个目的片段，还有一个连接产物，前两个是线性的，后面那个应该是环状的，至于是不是超螺旋就不知道了。你说酶切产物没有回收直接连接，你用的是fermentas的通用buffer？如果不是的话，一定要回收。还有，你电转质粒都没有出转化子，就是转化条件没有摸好。先用质粒摸索个最佳条件，因为连接效率再高也不如质粒的浓度高，对吧？ |
4楼2011-04-18 17:38:01
roomofxw
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5楼2011-04-18 17:53:19