| 查看: 2427 | 回复: 7 | |||
[求助]
酶连之后如何检测？
|
|
电泳检测的话，图谱应该是什么样子的？ 因为酶连之后做转化一直长不出来，所以在电转之前把酶连产物跑了电泳，电泳图谱类似于酶切之后的图谱。不是应该是连在载体上了吗？这个时候的质粒载体是什么状态呢？超螺旋，还是松弛闭环？ 我电转时也电了 质粒载体，当时切完载体并没有割胶回收，而是直接用来酶连了，这样也不会一点都不长吧？我电的质粒载体也没有长。。。。 求解答啊！！~~！！  |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有234人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 辣根过氧化物酶（HRP）酶活检测方法
已经有82人回复
- 微量样品酶催化时用什么装置？氩气保护情况下怎么进行产物的检测？
已经有3人回复
- 酶基因的过表达怎么检测呢
已经有8人回复
- 如何检测酶的活性？
已经有6人回复
- 碱性磷酸酶的检测
已经有17人回复
- 求助酶标记检测新方法
已经有6人回复
- 做电化学酶生物传感器检测农残的请进！讨论其应用及前景
已经有5人回复
- PCR产物酶切检测不到东西是为什么
已经有11人回复
- 【求助/交流】质粒DNA可以不通过酶切直接跑电泳检测吗？
已经有24人回复
- 一句关于有机磷酶联免疫吸附检测的翻译
已经有2人回复
- 【求助/交流】脂肪酶活性检测
已经有17人回复
- 如何设计实验检测蛋白酶的分泌途径
已经有2人回复
roomofxw
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 5
- 应助: 13 (小学生)
- 贵宾: 0.005
- 金币: 2882.1
- 散金: 69
- 红花: 7
- 帖子: 755
- 在线: 1020小时
- 虫号: 812203
- 注册: 2009-07-20
- 专业: 生物化学
2楼2011-04-18 17:17:09
3楼2011-04-18 17:25:17
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): good 2011-04-18 18:45:00
starfishfly(金币+1): 酶切产物没有做割胶回收，但是有重沉，这样的话也是不受离子的影响的吧。第一次转化是转化出来的，这次不知道怎么就是长不了了。条件是一样的，只是用的限制性内切酶不同。 2011-04-21 10:19:07
dhd997(金币+5): good 2011-04-18 18:45:00
starfishfly(金币+1): 酶切产物没有做割胶回收，但是有重沉，这样的话也是不受离子的影响的吧。第一次转化是转化出来的，这次不知道怎么就是长不了了。条件是一样的，只是用的限制性内切酶不同。 2011-04-21 10:19:07
| 如果你的连接效率还可以的话，连接液跑电泳，应该是三条带，一个载体，一个目的片段，还有一个连接产物，前两个是线性的，后面那个应该是环状的，至于是不是超螺旋就不知道了。你说酶切产物没有回收直接连接，你用的是fermentas的通用buffer？如果不是的话，一定要回收。还有，你电转质粒都没有出转化子，就是转化条件没有摸好。先用质粒摸索个最佳条件，因为连接效率再高也不如质粒的浓度高，对吧？ |
4楼2011-04-18 17:38:01
roomofxw
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 5
- 应助: 13 (小学生)
- 贵宾: 0.005
- 金币: 2882.1
- 散金: 69
- 红花: 7
- 帖子: 755
- 在线: 1020小时
- 虫号: 812203
- 注册: 2009-07-20
- 专业: 生物化学
5楼2011-04-18 17:53:19
空谷幽风
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 32
- 应助: 13 (小学生)
- 贵宾: 0.05
- 金币: 1106.1
- 散金: 500
- 红花: 13
- 帖子: 615
- 在线: 116.5小时
- 虫号: 714271
- 注册: 2009-03-04
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
6楼2011-04-18 18:07:05
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16348.8
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3652
- 在线: 289小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
7楼2011-04-18 18:12:19
8楼2013-03-14 14:05:59
20