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starfishfly

铜虫 (初入文坛)

[求助] 酶连之后如何检测?

电泳检测的话,图谱应该是什么样子的?
因为酶连之后做转化一直长不出来,所以在电转之前把酶连产物跑了电泳,电泳图谱类似于酶切之后的图谱。不是应该是连在载体上了吗?这个时候的质粒载体是什么状态呢?超螺旋,还是松弛闭环?
我电转时也电了 质粒载体,当时切完载体并没有割胶回收,而是直接用来酶连了,这样也不会一点都不长吧?我电的质粒载体也没有长。。。。
求解答啊!!~~!!
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): good 2011-04-18 18:45:33
连接完之后你直接去点样?这样也会有条带吗?这个我还真没有试过,不过你转化之后,如果连接上的话,就会在菌体内高拷贝的复制,这样提取出来的质粒量比较大,有利于电泳检测。

一般为了验证重组质粒的话,可以利用菌液进行PCR验证,如果有目的条带然后再进行重组质粒的提取,然后再酶切验证,电泳验证;

ps:电泳验证的时候可以点上你当时酶切的质粒和酶切的基因作为对照。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
7楼2011-04-18 18:12:19
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