24小时热门版块排行榜

返回列表

evoforever

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
贵宾: 0.05
金币: 7.8
散金: 100
红花: 25
帖子: 129
在线: 50.9小时
虫号: 797080
注册: 2009-06-22
专业: 基因表达调控与表观遗传学

[交流] 【求助/交流】蛋白酶表达出来没活性，奈何？已有2人参与

最近在表达检测一个细菌的蛋白酶。这个酶的全长用pET30a表达不出来。分析了一下结构发现N端有跨膜区和可能的信号肽序列，于是截了大概100 aa后，能够表达并纯化获得可溶的蛋白。可是在利用通用casein和azo-casein作为酶切底物时，检测不到任何酶活性，很郁闷，请各位出一出主意，如何改进这个实验。谢了先！

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

蛋白酶分离纯化已经有6人回复
蛋白酶菌株酶活问题已经有10人回复
求解蛋白酶测定过程中滴加碳酸钠后出现沉淀，附详细过程~~~ 已经有3人回复
毕赤酵母表达出蛋白但没有活性已经有18人回复
蛋白酶基因表达，用的Bacillus subtilis系统，但总是表达不出，求高人指点…… 已经有19人回复
gst标签，蛋白纯化已经有25人回复
地衣芽孢杆菌产生蛋白酶已经有11人回复
求，铜离子及EDTA对蛋白酶活性的影响与原因已经有1人回复
胃蛋白酶 3.000-3.500NF U/mg 已经有5人回复
微生物饲料中淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶的活性测定方法已经有4人回复
【求助】蛋白酶活力测定已经有7人回复
【求助/交流】蛋白酶去信号肽可以正常表达吗？和表达载体有关吗？已经有3人回复
【求助/交流】蛋白酶K溶解4°放置了5小时，会失活吗？已经有19人回复
【求助/交流】蛋白酶在大肠杆菌表达在牛奶平板上有透明圈，液体诱导却无酶活已经有5人回复
【求助/交流】大肠杆菌表达系统蛋白酶对目的蛋白的水解问题已经有11人回复

1楼 2011-04-15 14:40:14

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

MolEPI: 58
应助: 388 (硕士)
贵宾: 0.238
金币: 17138.7
红花: 43
帖子: 2251
在线: 712.4小时
虫号: 111074
注册: 2005-11-20
专业: 生物化学

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3): 鼓励发帖应助。 2011-04-15 20:25:57

引用回帖:

Originally posted by evoforever at 2011-04-15 14:40:14:
最近在表达检测一个细菌的蛋白酶。这个酶的全长用pET30a表达不出来。分析了一下结构发现N端有跨膜区和可能的信号肽序列，于是截了大概100 aa后，能够表达并纯化获得可溶的蛋白。可是在利用通用casein和azo-casein ...

你截去了的大概100 aa是不是包含了活性必须的，截短了之后对蛋白的空间结构有什么影响，这是两个关键，搞清楚了才有后面的对策。已经不是个简单的表达问题。