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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白酶表达出来没活性，奈何？
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evoforever

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】蛋白酶表达出来没活性，奈何？ 已有2人参与

最近在表达检测一个细菌的蛋白酶。这个酶的全长用pET30a表达不出来。分析了一下结构发现N端有跨膜区和可能的信号肽序列，于是截了大概100 aa后，能够表达并纯化获得可溶的蛋白。可是在利用通用casein和azo-casein作为酶切底物时，检测不到任何酶活性，很郁闷，请各位出一出主意，如何改进这个实验。谢了先！
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1楼 2011-04-15 14:40:14
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3): 鼓励发帖应助。 2011-04-15 20:25:57
引用回帖:
Originally posted by evoforever at 2011-04-15 14:40:14:
最近在表达检测一个细菌的蛋白酶。这个酶的全长用pET30a表达不出来。分析了一下结构发现N端有跨膜区和可能的信号肽序列，于是截了大概100 aa后，能够表达并纯化获得可溶的蛋白。可是在利用通用casein和azo-casein ...

你截去了的大概100 aa是不是包含了活性必须的，截短了之后对蛋白的空间结构有什么影响，这是两个关键，搞清楚了才有后面的对策。已经不是个简单的表达问题。
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2楼2011-04-15 16:25:19
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evoforever

铁虫 (小有名气)
是啊，看来是不是得一断一断截了……
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3楼2011-04-15 17:41:03
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