应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 【求助/交流】M13K07的扩增方法
41/1返回列表
查看: 1594  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

qingzi8575

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】M13K07的扩增方法

如题求助，因为冰箱里的M13好长时间了，想扩增一下，并于下一步提取单链DNA。
谁有比较详细的扩增方法阿？不要说分子克隆上的，那个有点乱。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-04-14 12:50:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

伊娃EVA

金虫 (职业作家)
★ ★ ★
qingzi8575(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+2): 鼓励积极参与讨论交流~~ 2011-04-15 17:55:14
qingzi8575(金币+5): 2011-04-17 09:20:05
1从平皿上挑取单个XLIBlu菌落(或TG1菌落)接种入40ml SBT溶液(含有四环素10μg/ml)(或2×YT培养液)中，37℃振荡培养过夜。
2将上述过夜培养菌1∶500稀释后加到10ml SBＴ或2×ＹＴ培养液中，37℃振荡培养1h。
3从噬菌体培养皿中挑取单个噬菌体(VCSM13或M13KO7)空斑，接种入上述10ml菌液中，37℃振荡培养2h
4加入SB培养液，含有10μg/ml四环素和70μg/ml卡那霉素，或2×YT培养液，含有70μg/ml卡那霉素，总量至500ml，37℃振荡培养过夜。3 500~4 000r/min 4℃离心15min。
5取上清，于70℃裂解20min,再次离心(此步可省略)。
6取上清，无菌分装小管中，每管10~20ml,存放4℃至少可使用半年。
大概就是这么做的  然后看你是什么菌
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-04-15 08:44:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qingzi8575

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 伊娃EVA at 2011-04-15 08:44:16:
1从平皿上挑取单个XLIBlu菌落(或TG1菌落)接种入40ml SBT溶液(含有四环素10μg/ml)(或2×YT培养液)中，37℃振荡培养过夜。
2将上述过夜培养菌1∶500稀释后加到10ml SBＴ或2×ＹＴ培养液中，37℃振荡培养1h。
3从 ...

我用的是xl1-blue，四环素抗性的，我想知道所有这些步骤里都加四环素还是只有开始挑单菌落培养的时候才加？
赞一下 回复此楼
3楼2011-04-17 09:21:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

伊娃EVA

金虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by qingzi8575 at 2011-04-17 09:21:15:
我用的是xl1-blue，四环素抗性的，我想知道所有这些步骤里都加四环素还是只有开始挑单菌落培养的时候才加？

这个我还真不清楚  不好意思啊
赞一下 回复此楼
4楼2011-04-17 18:28:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qingzi8575 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +9 Tide man 2026-08-10 10/500 2026-08-13 20:33 by 温淼淼淼
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 28/1400 2026-08-13 17:51 by 医学老男孩
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +4 majunge000 2026-08-11 6/300 2026-08-13 16:50 by 四季常青藤
[基金申请] filecode +14 documentary 2026-08-10 16/800 2026-08-13 16:39 by 润生71
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭