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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 【求助/交流】M13K07的扩增方法
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qingzi8575

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】M13K07的扩增方法

如题求助，因为冰箱里的M13好长时间了，想扩增一下，并于下一步提取单链DNA。
谁有比较详细的扩增方法阿？不要说分子克隆上的，那个有点乱。
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1楼 2011-04-14 12:50:51
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伊娃EVA

金虫 (职业作家)
★ ★ ★
qingzi8575(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+2): 鼓励积极参与讨论交流~~ 2011-04-15 17:55:14
qingzi8575(金币+5): 2011-04-17 09:20:05
1从平皿上挑取单个XLIBlu菌落(或TG1菌落)接种入40ml SBT溶液(含有四环素10μg/ml)(或2×YT培养液)中，37℃振荡培养过夜。
2将上述过夜培养菌1∶500稀释后加到10ml SBＴ或2×ＹＴ培养液中，37℃振荡培养1h。
3从噬菌体培养皿中挑取单个噬菌体(VCSM13或M13KO7)空斑，接种入上述10ml菌液中，37℃振荡培养2h
4加入SB培养液，含有10μg/ml四环素和70μg/ml卡那霉素，或2×YT培养液，含有70μg/ml卡那霉素，总量至500ml，37℃振荡培养过夜。3 500~4 000r/min 4℃离心15min。
5取上清，于70℃裂解20min,再次离心(此步可省略)。
6取上清，无菌分装小管中，每管10~20ml,存放4℃至少可使用半年。
大概就是这么做的  然后看你是什么菌
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2楼2011-04-15 08:44:16
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qingzi8575

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 伊娃EVA at 2011-04-15 08:44:16:
1从平皿上挑取单个XLIBlu菌落(或TG1菌落)接种入40ml SBT溶液(含有四环素10μg/ml)(或2×YT培养液)中，37℃振荡培养过夜。
2将上述过夜培养菌1∶500稀释后加到10ml SBＴ或2×ＹＴ培养液中，37℃振荡培养1h。
3从 ...

我用的是xl1-blue，四环素抗性的，我想知道所有这些步骤里都加四环素还是只有开始挑单菌落培养的时候才加？
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3楼2011-04-17 09:21:15
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伊娃EVA

金虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by qingzi8575 at 2011-04-17 09:21:15:
我用的是xl1-blue，四环素抗性的，我想知道所有这些步骤里都加四环素还是只有开始挑单菌落培养的时候才加？

这个我还真不清楚  不好意思啊
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4楼2011-04-17 18:28:53
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