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【求助/交流】M13K07的扩增方法
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如题求助，因为冰箱里的M13好长时间了，想扩增一下，并于下一步提取单链DNA。 谁有比较详细的扩增方法阿？不要说分子克隆上的，那个有点乱。 |
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qingzi8575(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+2): 鼓励积极参与讨论交流~~ 2011-04-15 17:55:14
qingzi8575(金币+5): 2011-04-17 09:20:05
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1从平皿上挑取单个XLIBlu菌落(或TG1菌落)接种入40ml SBT溶液(含有四环素10μg/ml)(或2×YT培养液)中，37℃振荡培养过夜。 2将上述过夜培养菌1∶500稀释后加到10ml SBＴ或2×ＹＴ培养液中，37℃振荡培养1h。 3从噬菌体培养皿中挑取单个噬菌体(VCSM13或M13KO7)空斑，接种入上述10ml菌液中，37℃振荡培养2h 4加入SB培养液，含有10μg/ml四环素和70μg/ml卡那霉素，或2×YT培养液，含有70μg/ml卡那霉素，总量至500ml，37℃振荡培养过夜。3 500~4 000r/min 4℃离心15min。 5取上清，于70℃裂解20min,再次离心(此步可省略)。 6取上清，无菌分装小管中，每管10~20ml,存放4℃至少可使用半年。 大概就是这么做的 然后看你是什么菌 |
2楼2011-04-15 08:44:16
3楼2011-04-17 09:21:15
4楼2011-04-17 18:28:53
