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chengjg

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[交流] 【讨论】苯酚硫酸法交流已有17人参与

我做苯酚硫酸法测定多糖，前几天硫酸用完了，今天买了一瓶新的，可是做实验室发现用刚买的硫酸做时空白都是深红色的样品颜色更深，没法做，稀释十倍才能有差别，请问一下大家又没遇到这样情况，还是我买的硫酸出问题了？

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1楼 2011-04-13 21:27:38

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yu27317961

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引用回帖:

Originally posted by chengjg at 2011-04-18 22:25:10:
可是我用别人买的硫酸做出来空白几乎没颜色。不同厂家硫酸差别回这么大？

你说的这种现象的确很常见，即使同一个人操作，2天检测同一个样品的结果也有很大的差距。
硫酸在本检测方法中的作用是水解多糖，但是高浓度的硫酸也有很强的氧化性，脱水性，试验检测的误差在硫酸这块的有很大。
苯酚在检测中试起到与醛、酮糖结合显色的作用
试验操作中苯酚被氧化显色，肯定是增大检测结果。
但是若果苯酚被氧化，则无法检测多糖是否全部参与显色，结果至少是低于实际值的。
两种情况一加一减，最终的结果很难说

样品+蒸馏水，+苯酚（迅速摇匀），+浓硫酸（迅速摇匀）
相信你在检测的时候也遇到了，硫酸不同加法的不同显色结果
沿壁--硫酸沉降在底部，可以很明显的看见显色是从不同密度的界面开始生成的
沿壁+旋转比色管---控制硫酸添加速度，可以看到颜色是从比色管壁开始生成，逐渐向中间生成
我个人就觉得旋转比色管沿壁加时，同一位置硫酸浓度增加相对来说较慢，避免了硫酸那多增加过快而增大了其氧化性的副作用。
另外，比色管选用25ml的比10ml的要好些吧，降低液面高度。可以很快的混匀样品。

[ Last edited by yu27317961 on 2011-4-19 at 09:19 ]