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chengjg

木虫 (正式写手)

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[交流] 【讨论】苯酚硫酸法交流已有17人参与

我做苯酚硫酸法测定多糖，前几天硫酸用完了，今天买了一瓶新的，可是做实验室发现用刚买的硫酸做时空白都是深红色的样品颜色更深，没法做，稀释十倍才能有差别，请问一下大家又没遇到这样情况，还是我买的硫酸出问题了？

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1楼2011-04-13 21:27:38

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yu27317961

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sweety: 回帖置顶 2011-12-30 09:35:51

引用回帖:

Originally posted by chengjg at 2011-04-13 21:27:38:
我做苯酚硫酸法测定多糖，前几天硫酸用完了，今天买了一瓶新的，可是做实验室发现用刚买的硫酸做时空白都是深红色的样品颜色更深，没法做，稀释十倍才能有差别，请问一下大家又没遇到这样情况，还是我买的硫酸出问 ...

首先，要确定你检测的标准曲线是不是准确的，主要是葡萄糖的含量
操作的时候有几条你需要注意的，这些对你的检测结果影响极大
1、苯酚需要重蒸，配制的苯酚溶液需要妥善保存。
2、样品检测的时候，向样品中加了苯酚溶液需要迅速摇匀，加入硫酸
基本操作：硫酸沿壁加，最好能旋转比色管，让硫酸能均匀的沿壁流下。
3、加完硫酸需要立即摇匀，前提是塞子要配套，不怕烫
热、冷水浴，要准确。

空白的颜色很深，说明你的空白中的苯酚被氧化了
深红是醌（苯酚氧化生成）的颜色
颜色过深的话说明你的酚的难度过大，一般是5%
但是没遇到你说的那么严重，不是深红色的
做的好的时候颜色很浅，颜色深点也有肯能。

不是你买的硫酸的问题，是苯酚或你添加硫酸后苯酚全部被氧化的原因。