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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】提取大肠杆菌中异源表达的蛋白用什么方法

质粒是pET29a，宿主菌是E.coli BL21(DE3)，抗生素是kan。
请问各位高手，转化后的阳性转化子，液体培养后，用什么方法提取大肠的总蛋白以供SDS-PAGE检测呢？
1.100℃煮沸后离心？
2.超声波破碎后离心？
3.细菌蛋白提取试剂盒？
请各位过来人不吝赐教，麻烦方法告知的详细点啊，小弟刚接触这行，在此膜拜了！

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1楼 2011-04-09 10:14:59

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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

xiaoyu1014126(金币+1): 2011-04-12 14:07:05

要是只用来做SDS-PAGE的话
直接收集菌体
SDS煮沸破裂
加上loading buffer开跑就OK了

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5楼2011-04-09 15:51:37

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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

xiaoyu1014126(金币+2): 2011-04-09 10:30:27

引用回帖:

Originally posted by xiaoyu1014126 at 2011-04-09 10:14:59:
质粒是pET29a，宿主菌是E.coli BL21(DE3)，抗生素是kan。
请问各位高手，转化后的阳性转化子，液体培养后，用什么方法提取大肠的总蛋白以供SDS-PAGE检测呢？
1.100℃煮沸后离心？
2.超声波破碎后离心？
3.细菌 ...

如果只是为了电泳，不需要特别提取的，直接离心收集菌体，加入上样buffer煮沸5min，然后离心，取上清去上样就是。

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2楼2011-04-09 10:27:43

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