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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)

应助: 7 (幼儿园)
金币: 2731.4
帖子: 749
在线: 227.7小时
虫号: 483157

[交流] 【求助/交流】提取大肠杆菌中异源表达的蛋白用什么方法

质粒是pET29a，宿主菌是E.coli BL21(DE3)，抗生素是kan。
请问各位高手，转化后的阳性转化子，液体培养后，用什么方法提取大肠的总蛋白以供SDS-PAGE检测呢？
1.100℃煮沸后离心？
2.超声波破碎后离心？
3.细菌蛋白提取试剂盒？
请各位过来人不吝赐教，麻烦方法告知的详细点啊，小弟刚接触这行，在此膜拜了！

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1楼 2011-04-09 10:14:59

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郝钊

金虫 (小有名气)

MolEPI: 1
应助: 6 (幼儿园)
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帖子: 175
在线: 38.8小时
虫号: 1003233

xiaoyu1014126(金币+1): 2011-04-09 12:52:17

我们将培养好的菌体浓缩一下超声破碎，离心后取上清，加入loading buffer就可以跑PAGE了

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3楼2011-04-09 11:35:22

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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

xiaoyu1014126(金币+2): 2011-04-09 10:30:27

引用回帖:

Originally posted by xiaoyu1014126 at 2011-04-09 10:14:59:
质粒是pET29a，宿主菌是E.coli BL21(DE3)，抗生素是kan。
请问各位高手，转化后的阳性转化子，液体培养后，用什么方法提取大肠的总蛋白以供SDS-PAGE检测呢？
1.100℃煮沸后离心？
2.超声波破碎后离心？
3.细菌 ...

如果只是为了电泳，不需要特别提取的，直接离心收集菌体，加入上样buffer煮沸5min，然后离心，取上清去上样就是。

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2楼2011-04-09 10:27:43

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