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【求助/交流】引物特异性PCR（SSP-PCR）检测SNP，是不是容易出现杂带呀已有6人参与
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用引物特异性PCR检测单点突变，下游引物一样，上游引物只差一个碱基。分别在两个体系（体系1和体系2）中进行PCR，我觉得结果应该是纯合子只有在体系1或体系2二者之一中有条带，杂合子两个体系都有带，且为同样亮度的。 但为什么我的结果总会是在一个体系中有清晰条带，另一体系中也有模糊条带。是不是这种方法容易出现这种情况，可不可以认为只要不是同等亮度的都可判断为纯合型？ 请各位大侠指教！非常感谢！ |
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5楼2011-04-08 13:12:15
你跟我做的好像啊。。。“下游引物一样，上游引物只差一个碱基”。我在两个体系中也遇到过这样的问题，你可以提高退火温度或加DMSO看看，可能有些是非特异性条带。。。我原先以为做这个特异性很难保证，但现在看来特异性还是可以的，没有遇到什么非特异性条带（我现在已经合成一个体系了）
2楼2011-04-08 10:19:16
3楼2011-04-08 10:30:55
4楼2011-04-08 12:05:12