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321wangke321

金虫 (正式写手)

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虫号: 1169264

[交流] 【求助】定量PCR之RNA提取质量疑问

我提前的植物的RNA，A260/A280=1.86，但是A260/A230=0.5，不知道这样的RNA能否做定量PCR，谢谢

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1楼 2011-04-07 20:47:52

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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

321wangke321(金币+10): 2011-04-09 17:33:24
amisking(EPI+1): good！ 2011-04-09 18:38:17

A260nm
是核酸最高吸收峰的吸收波长，最佳测量值的范围为0.1至1.0。如果不在此范围，稀释或浓缩样品，使之在此范围内；如果吸光度小于0.05，检查是否存在操作因素（如移液不准确，样品内有悬浮物等）影响。DNA样品的A260 吸光度值是否>0.1。（请注意，这个值跟仪器无关，核酸的吸光度必需大于0.1，其值才有效和可靠，因为样品中的杂质和颗粒这些不纯物的干扰通常会对光有一定吸收，其值<0.1）；

A280nm
是蛋白和酚类物质最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯DNA的A260/A280比值为1.8，纯RNA为2.0。如果比值低，表示受到蛋白（芳香族）或酚类物质的污染，需要纯化样品。比值=1.5相当于50％蛋白质/DNA溶液；

A230nm
是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯DNA和 RNA的A260/A230比值为2.5。若比值小于2.0标明样品被碳水化合物（糖类）、盐类或有机溶剂污染，需要纯化样品。A230产生负值主要是由于在很低DNA 浓度的溶液中的一些其他成分的干扰所导致的。在下一个测定中，需要降低样品的稀释度，A230的负值会被校正。

A260/A280和A260/A230
是核酸纯度的指示值，纯度好的DNA，在pH7-8.5 下其比值应该在2.0 或2.5，A260 / A280的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是280 nm。纯净的样品比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。
A230是多肽、芳香基团、苯酚和一些碳氢化合物的吸光度，A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物、多肽、苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0 。A280是蛋白质的吸光度。

A260/A230=0.5意味着你的RNA样品中A230太高，意味着就是杂质太高，应该是植物细胞中的多糖，多肽，酚残留量大了点
建议最好还是重做一下RNA

[ Last edited by jhu132llh on 2011-4-8 at 10:21 ]

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