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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】pET29a质粒提取量不够!

pET29a总是提取的浓度不高,而且提取后要用kpnI和EcoRI双酶切,同时酶切的话,在M缓冲液体系中,酶切活性不高,总是且不完全,所以选择分两步单酶切完成,这样就造成另一个问题,本来质粒pET29a提取的浓度就不够,再两次酶切经过两次回收后,浓度就只有3.2ng/ul了,再做酶连转化,效率肯定不行了啊!有没有高手看看问题在哪,指导下新人吧!
谢谢!
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lanjb1013

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
原核表达载体的拷贝数不是很高,但是通常构建载体还是没有问题。提高质粒浓度,换双酶切体系。
10楼2012-05-14 11:27:43
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