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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】western blot 缺带 断带
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ybh1987213

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】western blot 缺带 断带

最近做Western blot 出现了比较诡异的问题，一个流程下来，胶片的曝光结果上有个别条带断开，或者干脆就缺失，包括泳道背景也丢失了，就好像膜上有个大气泡一样。但是膜用立春红染后相当完整，我抗体孵育的时候杂交袋中的抗体工作液也相当充盈，肯定没有气泡，不知是什么原因导致的。
初步怀疑可能在底物显色的时候用玻璃棒赶发光也所致，不知道有没有道理，各位有没有什么好办法可以避免这样的悲剧。
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1楼 2011-04-02 14:58:46
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ybh1987213

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by nirvana0724 at 2011-04-10 13:14:51:
转膜和孵抗体确定都没问题的话，基本上就是最后显色液的问题了   做个重复就清楚了

不知道您指的重复是什么样的。
我个人觉得WB的重复性不是特别的好，我用同一个样品上了8次重复，出来的带都会有差异，这个差异有时候很小，有时候很大，人毕竟不是机器，试剂也不是只用那一批。。。WB这实验啊。。。变数太多了。
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21楼2011-04-24 15:30:18
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dreaming0816

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-04-04 08:33:28
如果是曝光的问题，可以改作DAB显色，凝胶成像系统拍照分析啊。
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2楼2011-04-03 17:10:50
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funking

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-04-04 08:33:39
转膜和孵抗体确定都没问题的话，基本上就是最后显色液的问题了   做个重复就清楚了
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3楼2011-04-03 22:56:14
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)
★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-04-06 18:33:30
可能会是转膜的时候在滤纸，什么的上面有残留气泡影响了蛋白质的转膜过程即残留有气泡的地方可能就没发生蛋白质转移
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4楼2011-04-05 17:38:21
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