应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】两条序列只有1-2个变异位点，能设计特异引物区别出来吗？
241/1返回列表
查看: 4708  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看

hexf

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】两条序列只有1-2个变异位点，能设计特异引物区别出来吗？

RT

[ Last edited by 1949stone on 2011-4-2 at 10:54 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-04-01 23:00:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
hexf(金币+1): 同求同求 2011-04-02 09:08:08
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-04-02 10:54:54
我试过用PCR鉴定一个单个碱基突变的基因，效果不好，对照和突变体都能扩增出来……
顶一顶
求高人解答，呵呵~
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-04-01 23:39:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaquila

金虫 (正式写手)
★
hexf(金币+1): 酶切位点的方法已用过，所以想用PCR来分 2011-04-02 09:08:56
1949stone(金币+1): 是个办法 2011-04-02 10:55:06
楼主可以试试有没有酶切位点识别這个序列
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-04-02 08:37:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaquila

金虫 (正式写手)
★ ★
hexf(金币+3): 2011-04-02 09:07:42
1949stone(金币+2): 最好分开调 2011-04-02 10:55:28
如果要设计引物，要保证一条引物的三端在这个碱基上，引物要短，降低镁离子浓度，试试最高的退火温度
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-04-02 08:40:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)
hexf(金币+1): 样品量太大了，没那个钱一个一个测通，所以想此下策 2011-04-02 10:39:34
序列多长？测通不就搞定了。
赞一下 回复此楼
5楼2011-04-02 09:46:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hexf

木虫 (正式写手)
1949stone: 为什么说没有特异性？你要看扩出的结果 低温当然可以扩出来 2011-04-03 15:50:03
引用回帖:
Originally posted by shaquila at 2011-04-02 08:40:06:
如果要设计引物，要保证一条引物的三端在这个碱基上，引物要短，降低镁离子浓度，试试最高的退火温度

设计了引物回来，将突变的位点在3'的第一个位点，试过用温度梯度PCR检测退火温度，发现从48-60度都能扩增出条带，并且两个样品都能扩增出来。所以没有特异性
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-04-02 10:03:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaquila

金虫 (正式写手)
★ ★
dhd997(金币+2): 欢迎交流 2011-04-02 12:26:25
楼主退火最高才60啊，试试65以上吧～～
或者把你引物序列发上来看看
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-04-02 10:23:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hexf

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by shaquila at 2011-04-02 10:23:51:
楼主退火最高才60啊，试试65以上吧～～
或者把你引物序列发上来看看

我把序列发上来吧
Genbank上的号：DQ821670 ， DQ821671， DQ821672共三条序列，设计特异引物做M-PCR来区分这三个东西。
赞一下 回复此楼
8楼2011-04-02 10:31:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yj-lzx

荣誉版主 (文坛精英)
★
1949stone(金币+1, EPI+1): 专业 2011-04-02 10:58:58
给你个文献~~~可以鉴别单个碱基突变的~~~
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2011-04-02 10:50:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dhd997

荣誉版主 (文坛精英)
hexf(金币+1): 版版进来了，马上给个红包（旁人请回避，我可不想公开行贿） 2011-04-02 14:42:33
引用回帖:
Originally posted by yj-lzx at 2011-04-02 10:50:38:
给你个文献~~~可以鉴别单个碱基突变的~~~

开始搞专业的了
回复此楼
10楼2011-04-02 12:26:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yj-lzx

荣誉版主 (文坛精英)
★ ★ ★
hexf(金币+2): 你们太给力了，先给BB再看文献！ 2011-04-02 14:38:34
1949stone(金币+3): 连续鼓励 2011-04-02 20:49:12
给楼主个英文的~~~
http://g.zhubajie.com/urllink.php?id=10923033x8pnw2ujpt29tbpb
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2011-04-02 12:48:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaquila

金虫 (正式写手)
很好啊，专业搞genotyping的～
赞一下 回复此楼
13楼2011-04-02 14:09:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hexf

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by shaquila at 2011-04-02 14:09:06:
很好啊，专业搞genotyping的～

上来报告
退火温度到了65度，果然有些出来有些不出来了，初步结果还比较满意，但是明天还要多做一个M-PCR，希望结果能稳定。
谢谢shaquila
赞一下 回复此楼
14楼2011-04-03 00:14:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小燕子包谷

金虫 (正式写手)
★
hexf(金币+1):谢谢参与
顶一个
回复此楼
15楼2011-04-03 01:01:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
hexf(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+3): good 2011-04-04 08:29:48
做HRM，单碱基的话480和rotor-gene可区分~~~两个的话7500之类的也可以了。虽然7500做单碱基或许也可以~
赞一下(2人) 回复此楼
16楼2011-04-03 15:41:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaquila

金虫 (正式写手)
★ ★
dhd997(金币+2, EPI+1): 综合本贴所有答案，鼓励交流 2011-04-04 08:31:33
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-04-03 15:41:14:
做HRM，单碱基的话480和rotor-gene可区分~~~两个的话7500之类的也可以了。虽然7500做单碱基或许也可以~

HRM很好娃，但是楼主貌似没有这设备和方案～～～
如果知道突变位点，用一些比较原始的方法应该也凑合，呵呵
赞一下(1人) 回复此楼
17楼2011-04-03 16:13:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaquila

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by hexf at 2011-04-03 00:14:44:
上来报告
退火温度到了65度，果然有些出来有些不出来了，初步结果还比较满意，但是明天还要多做一个M-PCR，希望结果能稳定。
谢谢shaquila

是呀是呀，类似的实验我有试过，退火临界值是可以初步区分出变异序列的～～
不过条件还是要摸索下，65也许不是最好的，可以在试试这个范围，结果可能可以更清楚
赞一下 回复此楼
18楼2011-04-03 16:15:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dreaming0816

金虫 (著名写手)
★
hexf(金币+1):谢谢参与
可以通过Real-time检测点突变的奥，，，
赞一下(1人) 回复此楼
19楼2011-04-03 18:46:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hexf

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-04-03 15:41:14:
做HRM，单碱基的话480和rotor-gene可区分~~~两个的话7500之类的也可以了。虽然7500做单碱基或许也可以~

啥叫HRM？
回复此楼
20楼2011-04-03 23:45:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hexf

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by dreaming0816 at 2011-04-03 18:46:47:
可以通过Real-time检测点突变的奥，，，

这个仪器正在买，还在路上，不知什么时候才能到实验室里。
赞一下 回复此楼
21楼2011-04-03 23:45:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-04-04 08:30:17
引用回帖:
Originally posted by hexf at 2011-04-03 23:45:20:
啥叫HRM？

高分辨率溶解曲线

High Resolution Melting-curve

你可以去查查相关文献
赞一下(1人) 回复此楼
22楼2011-04-03 23:47:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tangbohejin

木虫之王 (文学泰斗)
★
hexf(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by shaquila at 2011-04-02 08:37:07:
楼主可以试试有没有酶切位点识别這个序列

顶----
回复此楼
23楼2011-04-04 23:57:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jessica533

新虫 (小有名气)
★
hexf(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by yj-lzx at 2011-04-02 10:50:38:
给你个文献~~~可以鉴别单个碱基突变的~~~

谢谢分享 了解一下
回复此楼
24楼2011-04-05 10:05:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
yj-lzx11楼
2011-04-02 12:47   回复  
引用回帖:
Originally posted by dhd997 at 2011-04-02 12:26:45: 开始搞专业的了

~~~
相关版块跳转 我要订阅楼主 hexf 的主题更新
241/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 3/150 2026-09-20 01:27 by 9i7PCSZyMzot
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 3/150 2026-09-20 01:27 by 9i7PCSZyMzot
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 3/150 2026-09-20 01:15 by 9i7PCSZyMzot
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 3/150 2026-09-20 01:03 by 9i7PCSZyMzot
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 3/150 2026-09-20 00:51 by 9i7PCSZyMzot
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 3/150 2026-09-20 00:15 by 9i7PCSZyMzot
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 3/150 2026-09-20 00:03 by 9i7PCSZyMzot
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-20 00:03 by 9i7PCSZyMzot
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-19 23:51 by 9i7PCSZyMzot
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-19 23:39 by 9i7PCSZyMzot
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-19 23:27 by 9i7PCSZyMzot
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-19 23:27 by 9i7PCSZyMzot
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-19 23:03 by 9i7PCSZyMzot
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-19 23:03 by 9i7PCSZyMzot
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-18 7/350 2026-09-19 21:03 by 9i7PCSZyMzot
[教师之家] 现代”学阀”该如何界定 +3 iaeyuan 2026-09-19 3/150 2026-09-19 20:52 by 没昵称呀
[基金申请] 国社科系统bug了，是不是要放榜了？ +7 kynobel 2026-09-16 9/450 2026-09-19 14:52 by 接好运婷
[有机交流] 各位大神，目前国内有哪些比较好用的逆合成软件？ 20+3 zapen 2026-09-15 9/450 2026-09-18 18:17 by zapen
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组｜2027级博士研究生招生公告 +7 水士口 2026-09-16 8/400 2026-09-16 13:47 by kkklens
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +8 两三岁ss 2026-09-14 8/400 2026-09-16 09:46 by 水士口
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭