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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】两条序列只有1-2个变异位点，能设计特异引物区别出来吗？
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hexf

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】两条序列只有1-2个变异位点，能设计特异引物区别出来吗？

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[ Last edited by 1949stone on 2011-4-2 at 10:54 ]
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1楼 2011-04-01 23:00:23
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shaquila

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by hexf at 2011-04-03 00:14:44:
上来报告
退火温度到了65度，果然有些出来有些不出来了，初步结果还比较满意，但是明天还要多做一个M-PCR，希望结果能稳定。
谢谢shaquila

是呀是呀，类似的实验我有试过，退火临界值是可以初步区分出变异序列的～～
不过条件还是要摸索下，65也许不是最好的，可以在试试这个范围，结果可能可以更清楚
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18楼2011-04-03 16:15:12
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
hexf(金币+1): 同求同求 2011-04-02 09:08:08
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-04-02 10:54:54
我试过用PCR鉴定一个单个碱基突变的基因，效果不好，对照和突变体都能扩增出来……
顶一顶
求高人解答，呵呵~
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-04-01 23:39:49
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shaquila

金虫 (正式写手)
★
hexf(金币+1): 酶切位点的方法已用过，所以想用PCR来分 2011-04-02 09:08:56
1949stone(金币+1): 是个办法 2011-04-02 10:55:06
楼主可以试试有没有酶切位点识别這个序列
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3楼2011-04-02 08:37:07
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shaquila

金虫 (正式写手)
★ ★
hexf(金币+3): 2011-04-02 09:07:42
1949stone(金币+2): 最好分开调 2011-04-02 10:55:28
如果要设计引物，要保证一条引物的三端在这个碱基上，引物要短，降低镁离子浓度，试试最高的退火温度
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4楼2011-04-02 08:40:06
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yj-lzx11楼
2011-04-02 12:47   回复  
引用回帖:
Originally posted by dhd997 at 2011-04-02 12:26:45: 开始搞专业的了

~~~
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