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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助：5.5KPCR片段连接难，请教！！
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xiaojing459

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助：5.5KPCR片段连接难，请教！！

求助：我的片段约5.5 K, 连接到pGEM-T载体上，老是连接失败，挑不到阳性克隆，麻烦有经验的帮我想想办法，提些建议，多谢！
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1楼 2011-03-31 21:09:08
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yehuanren

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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dhd997(金币+6): good 2011-04-01 20:01:39
我前段时间也做了，pcr用的酶是 LA tag，用的是promega公司的 PGEM-Teasy 载体。转化大肠杆菌后倒是能长出慢慢的 蓝白斑。挑单菌落后提质粒，电泳检测每个质粒有好多条带，不知道为什么。拿了一管菌液去测序了。还不知道结果如何。
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8楼2011-04-01 18:18:55
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yehuanren

新虫 (初入文坛)
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dhd997(金币+3): good 2011-04-02 08:15:48
T载体1微升，buffer 5微升，T4 DNA 连接酶 1微升，剩下的都加pcr产物，不加dd水
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9楼2011-04-01 18:22:03
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yehuanren

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
T载体1微升，buffer 5微升，T4 DNA 连接酶 1微升，剩下的都加pcr产物，不加dd水。总共10微升。
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10楼2011-04-01 18:54:09
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