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落雪含香金虫 (正式写手)
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[交流]
【求助】HPLC基线漂移问题 已有9人参与
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我的HPLC的流动相是 A：含TFA0.01%的水 B：含TFA0.01%的乙腈 用5%~95%的B梯度洗脱，测定波长为220，柱子平衡了一个多小时，但是还是基线漂移，就连进样量为零的时候，都漂移，空白溶剂也漂移，样品也漂移，但是可以看到样品比空白溶剂多一个小小峰，这是怎么回事？我还能继续做吗？如何解决呢？ 谢谢大家的回复，我后来把检测波长换成270nm了，基线虽然还是有些漂移，但已经好多了，样品的峰也明显了，我想应该还是梯度洗脱与检测波长的原因，机器还是一年前买的，不会是机器故障，流动相都是用的HPLC级别的，并过滤除气，流动相的影响不大。TFA我是必须加入到流动相中，用于保护我的样品，因为样品里面有多肽。 谢谢大家的热心回复 [ Last edited by 落雪含香 on 2011-4-6 at 11:23 ] |
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由于TFA本身是有紫外吸收，往往在水和乙腈溶液中的紫外吸收也是不一样的（在220nm时TFA-乙腈高于TFA-水，210nm正好相反），所以你会发现你的基线是会随着乙腈的比例增加而一直往上飘直到95%保持不变，这个是正常现象。 不同厂家生产的HPLC级的TFA质量不尽相同，就我个人经历发现只有少数几家的（新开瓶的）TFA配流动相走基线不会有小杂峰，不同厂家生产的TFA形成的杂峰都不一样的，这个实际就是TFA里面的有强紫外吸收的杂质，大部分情况下对于我们日常分析都不会有太大影响，偶尔碰到做杂质检查时可能会干扰测定，这时要么换进口的高质量TFA（推荐 J.T.Baker的），要么改改梯度分开它们。 |
10楼2011-04-02 20:20:13
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