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xukun1176

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】我走高效液相色谱的基线为什么会这样?(现在可以看到图了) 已有8人参与

我用HPLC来分离多肽,用的柱子是C18
第一张图的流动相是:
   A:H20(含0.1%TFA)   B:乙腈(不含TFA)
第二和三张图的流动相是:
   A:H20(含0.1%TFA)   B:乙腈(含0.1%TFA)

洗脱条件均为:
                   A(%)             B(%)
0min                 95                   5
10min               95                   5
60min               0                   100
70min               0                   100
流速为1ml/min;

其中:第一张图与第二、三张图是分别在不同的地方走了,用的柱子也不同。
第三张图走的是制备型的C18,但是柱子材料和第二张图的完全一样。

那请问大家,为什么当我的目标峰出现后,基线总是会飘移呢?而且还是B中未加TFA的向下飘,加了TFA的向上漂,什么原因呢?那要怎么做才能抑制基线漂移呢?

另外,为什么走制备型的C18,我的目标峰会变成波浪状的山包呢?
谢谢!!!

(1)乙腈中未加TFA

(2)乙腈中加了TFA
(3)制备型C18,流动相条件和柱子填料与(2)图相同,乙腈中加了TFA


[ Last edited by xukun1176 on 2010-9-11 at 14:54 ]
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无风的小屋

金虫 (小有名气)


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LZ什么东东啊?看不到图片啊!
Nocross,nocrown.
2楼2010-09-11 13:54:32
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xukun1176

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 无风的小屋 at 2010-09-11 13:54:32:
LZ什么东东啊?看不到图片啊!

什么情况呢?我这里可以显示啊
3楼2010-09-11 14:07:57
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xukun1176

银虫 (小有名气)

没人知道吗?
4楼2010-09-12 10:48:20
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qdeev

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
感觉第三张图的样品像是没进到柱子中。。。很有可能是扎空了。。每次的结果都是这样子的?还是只是一次的结果?

基线漂移无解。。可能是柱子的问题,机子的问题。。不好说。。机子用的是什么牌子?
5楼2010-09-12 10:54:25
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xukun1176

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by qdeev at 2010-09-12 10:54:25:
感觉第三张图的样品像是没进到柱子中。。。很有可能是扎空了。。每次的结果都是这样子的?还是只是一次的结果?

基线漂移无解。。可能是柱子的问题,机子的问题。。不好说。。机子用的是什么牌子?

制备型柱子每次上样都是这样;第一张的机子是安捷伦的,后面两张的是用国产的!我的峰这么尖,它会是纯物质吗?谢谢知道!
6楼2010-09-12 11:04:24
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qdeev

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
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lstt09nk(金币+3):鼓励积极解答的童鞋~ 2010-09-13 09:21:23
制备型每次都这样?做了几次?仔细看了几遍图,还是感觉像是样品没进到柱子里,吸收值都太低了,因为在分析柱中,样品吸收值和水峰差不多,但是制备型里峰没有一个有和水峰同样的吸收值,要么就是你的样品不纯被拖成了N多个物质(可能性不大)要么就是样品没进到柱子或是还没洗脱出来。。。而且制备型的基线漂移也还好,范围只是20以内。。。

液相上只是大体看看峰型来判断样品纯度。。如果是单峰而且对称性比较好的话,可以初步判定是纯品了。。不过最好是进一步通过核磁和质谱进行鉴定。

基线漂移无解。。同求高手解答。。
7楼2010-09-13 07:48:16
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asd123xukun

铜虫 (小有名气)


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引用回帖:
Originally posted by qdeev at 2010-09-13 07:48:16:
制备型每次都这样?做了几次?仔细看了几遍图,还是感觉像是样品没进到柱子里,吸收值都太低了,因为在分析柱中,样品吸收值和水峰差不多,但是制备型里峰没有一个有和水峰同样的吸收值,要么就是你的样品不纯被拖 ...

每次都这样啊,在走制备型色谱的时候,我们都把相应值降到很低,这是人为的调的,并不是没有吸附上去
制备型柱子的峰就是这样啊,变成了一个山包,请问知道为什么会这样吗?
还有,第一幅图的峰那么尖,就此能判断这个一个纯物质吗?
谢谢!
8楼2010-09-15 11:28:41
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路人甲007

木虫 (正式写手)

小七


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后面的飘移飘的好诡异啊,是不是你的色谱柱有问题啊,加上是制备型的色谱仪
你们以前分的时候有过这样的现象吗
与人玫瑰手有余香
9楼2010-10-30 14:15:53
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lizh736

银虫 (正式写手)


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我觉得很正常。我们用HPLC制备时,用梯度洗脱时,到后面基线就飘得很厉害!
奋斗
10楼2010-11-23 14:18:59
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