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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】我走高效液相色谱的基线为什么会这样？（现在可以看到图了）
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xukun1176

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】我走高效液相色谱的基线为什么会这样？（现在可以看到图了） 已有8人参与

我用HPLC来分离多肽，用的柱子是C18
第一张图的流动相是：
   A：H20（含0.1%TFA）   B：乙腈（不含TFA）
第二和三张图的流动相是：
   A：H20（含0.1%TFA）   B：乙腈（含0.1%TFA）

洗脱条件均为：
                   A（%）             B（%）
0min                 95                   5
10min               95                   5
60min               0                   100
70min               0                   100
流速为1ml/min；

其中：第一张图与第二、三张图是分别在不同的地方走了，用的柱子也不同。
第三张图走的是制备型的C18，但是柱子材料和第二张图的完全一样。

那请问大家，为什么当我的目标峰出现后，基线总是会飘移呢？而且还是B中未加TFA的向下飘，加了TFA的向上漂，什么原因呢？那要怎么做才能抑制基线漂移呢？

另外，为什么走制备型的C18，我的目标峰会变成波浪状的山包呢？
谢谢！！！

（1）乙腈中未加TFA

（2）乙腈中加了TFA
（3）制备型C18，流动相条件和柱子填料与（2）图相同，乙腈中加了TFA


[ Last edited by xukun1176 on 2010-9-11 at 14:54 ]
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1楼 2010-09-11 13:52:35
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无风的小屋

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
LZ什么东东啊？看不到图片啊！
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Nocross，nocrown.
2楼2010-09-11 13:54:32
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xukun1176

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 无风的小屋 at 2010-09-11 13:54:32:
LZ什么东东啊？看不到图片啊！

什么情况呢？我这里可以显示啊
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3楼2010-09-11 14:07:57
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xukun1176

银虫 (小有名气)
没人知道吗？
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4楼2010-09-12 10:48:20
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qdeev

金虫 (正式写手)
★
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感觉第三张图的样品像是没进到柱子中。。。很有可能是扎空了。。每次的结果都是这样子的？还是只是一次的结果？

基线漂移无解。。可能是柱子的问题，机子的问题。。不好说。。机子用的是什么牌子？
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5楼2010-09-12 10:54:25
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xukun1176

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by qdeev at 2010-09-12 10:54:25:
感觉第三张图的样品像是没进到柱子中。。。很有可能是扎空了。。每次的结果都是这样子的？还是只是一次的结果？

基线漂移无解。。可能是柱子的问题，机子的问题。。不好说。。机子用的是什么牌子？

制备型柱子每次上样都是这样；第一张的机子是安捷伦的，后面两张的是用国产的！我的峰这么尖，它会是纯物质吗？谢谢知道！
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6楼2010-09-12 11:04:24
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qdeev

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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lstt09nk(金币+3):鼓励积极解答的童鞋~ 2010-09-13 09:21:23
制备型每次都这样？做了几次？仔细看了几遍图，还是感觉像是样品没进到柱子里，吸收值都太低了，因为在分析柱中，样品吸收值和水峰差不多，但是制备型里峰没有一个有和水峰同样的吸收值，要么就是你的样品不纯被拖成了N多个物质（可能性不大）要么就是样品没进到柱子或是还没洗脱出来。。。而且制备型的基线漂移也还好，范围只是20以内。。。

液相上只是大体看看峰型来判断样品纯度。。如果是单峰而且对称性比较好的话，可以初步判定是纯品了。。不过最好是进一步通过核磁和质谱进行鉴定。

基线漂移无解。。同求高手解答。。
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7楼2010-09-13 07:48:16
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asd123xukun

铜虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
Originally posted by qdeev at 2010-09-13 07:48:16:
制备型每次都这样？做了几次？仔细看了几遍图，还是感觉像是样品没进到柱子里，吸收值都太低了，因为在分析柱中，样品吸收值和水峰差不多，但是制备型里峰没有一个有和水峰同样的吸收值，要么就是你的样品不纯被拖 ...

每次都这样啊，在走制备型色谱的时候，我们都把相应值降到很低，这是人为的调的，并不是没有吸附上去
制备型柱子的峰就是这样啊，变成了一个山包，请问知道为什么会这样吗？
还有，第一幅图的峰那么尖，就此能判断这个一个纯物质吗？
谢谢！
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8楼2010-09-15 11:28:41
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路人甲007

木虫 (正式写手)

小七
★
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后面的飘移飘的好诡异啊，是不是你的色谱柱有问题啊，加上是制备型的色谱仪
你们以前分的时候有过这样的现象吗
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与人玫瑰手有余香
9楼2010-10-30 14:15:53
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lizh736

银虫 (正式写手)
★
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我觉得很正常。我们用HPLC制备时，用梯度洗脱时，到后面基线就飘得很厉害！
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奋斗
10楼2010-11-23 14:18:59
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