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txzhuwenxiu6285

新虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】求PCR二次扩增引物

我做的是厌氧反应器中微生物群落的变化，现在已经做好DGGE了，下面就是胶回收后在PCR，然后测序。我第一次PCR时用的引物是341FGC和534R，想二次扩增时用引物GC2-341和534R，以及测序之前用引物GC1-S和534R，请问哪位高手能告诉我GC2-341和GC1-S的引物序列，我想让上海生工帮我合成，万分感谢！！！急！！！！

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1楼 2011-03-29 16:07:04

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tingspdf

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★
txzhuwenxiu6285(金币+1):谢谢参与
txzhuwenxiu6285(金币+1): 2011-03-29 22:39:10

帮楼主顶起，顺便问问楼主用什么方法回收的DGGE片段？

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2楼2011-03-29 17:24:32

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txzhuwenxiu6285

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Sample Text
我买的是专门的回收试剂盒回收的，下步就不知道这个引物具体什么设计了，你能帮帮我吗

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3楼2011-03-29 22:38:37

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tingspdf

至尊木虫 (著名写手)

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引用回帖:

Originally posted by txzhuwenxiu6285 at 2011-03-29 22:38:37:
Sample Text
我买的是专门的回收试剂盒回收的，下步就不知道这个引物具体什么设计了，你能帮帮我吗

这两个引物名称你是从哪查的？

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4楼2011-03-30 09:04:16

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nienie2008

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★
txzhuwenxiu6285(金币+1):谢谢参与

我也想做类似的实验，楼主能写明回收试剂盒的具体名称吗？我上网查了，大部分试剂盒都是针对琼脂糖凝胶的。另外，不知楼主从哪查的这些引物，用PCR引物测序不行吗？

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5楼2011-03-30 15:38:06

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txzhuwenxiu6285

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Originally posted by tingspdf at 2011-03-30 09:04:16:
这两个引物名称你是从哪查的？

我们这有个老师在日本呆了好几年她一直是做DGGE的她当时也是做的厌氧反应器中的微生物菌群，她建议我查这两个引物的。

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6楼2011-03-31 22:54:01

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txzhuwenxiu6285

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dhd997(金币+3): 热心。 2011-04-01 08:43:41

引用回帖:

Originally posted by nienie2008 at 2011-03-30 15:38:06:
我也想做类似的实验，楼主能写明回收试剂盒的具体名称吗？我上网查了，大部分试剂盒都是针对琼脂糖凝胶的。另外，不知楼主从哪查的这些引物，用PCR引物测序不行吗？

上海生工的UNIQ-10柱式PAGE胶回收试剂盒你可以到他们公司页面上下载这个试剂盒的PDF说明，看看你能不能用；另外，你是不是研究的具体的哪个微生物，然后PCR产物可以直接测序，而我的是一个反应器中的整个微生物菌群，所以我是做完DGGE后，将优势菌种的条带切下，然后回收，再PCR，最后再测序的，而上面两个引物就是我二次增幅所想要用的引物，但是我一直找不到这个序列，所以纠结，虽然用之前的引物也可以，但可能扩增的特异性不好，那样测序的结果可能不太好。

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7楼2011-03-31 22:59:06

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sunbio

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txzhuwenxiu6285(金币+1):谢谢参与

本帖内容被屏蔽

8楼2011-04-01 10:52:14

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sai00fuji

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txzhuwenxiu6285(金币+1):谢谢参与

小广告真多啊

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9楼2011-04-05 23:06:45

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良缘百合

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txzhuwenxiu6285(金币+1):谢谢参与

DGGE之前的PCR,引物带夹子是为防止完全解链，DGGE后的PCR引物为什么还要带夹子呢？不知道是什么原理啊
我按“张永生，2010，贝加尔针茅”的那篇的文章扩增了341f和518r，准备DGGE后的PCR用……

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10楼2011-05-25 08:23:36

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王冠傑

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txzhuwenxiu6285(金币+1): 谢谢参与

直接找生工问不行吗

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11楼2015-05-13 08:48:17

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halfbeer

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12楼2015-05-13 10:01:22

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