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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】帮忙分离蛋白质
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lsx08

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】帮忙分离蛋白质

我现在要用HPLC在保持蛋白活性的前提下将蛋白质样品中的杂蛋白与其分离，可是摸索了好久都没有分离开，不知道有没有虫友知道哪里可以帮忙做？实验室、公司、个人均可，谢谢了！
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1楼2011-03-28 09:37:45
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lsx08

新虫 (初入文坛)
请虫友帮忙推荐一下，谢谢了！
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2楼2011-03-28 16:24:18
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lanshunzi

金虫 (小有名气)
★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢分享经验~ 2011-03-29 18:09:25
lsx08(金币+2): 2011-03-30 08:25:26
我目前的工作也是用HPLC分离蛋白质 你加0.1%的三氟乙酸看看，可能效果会好些！大分子蛋白质建议用SB-300柱 小分子肽类用ODS-A柱！这是我的经验，希望有所帮助 ！
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3楼2011-03-29 17:46:45
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wanzi2222

铜虫 (小有名气)
lsx08(金币+2): 2011-03-30 08:31:15
用fplc分离蛋白好些吧！
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4楼2011-03-29 21:48:47
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lsx08

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by lanshunzi at 2011-03-29 17:46:45:
我目前的工作也是用HPLC分离蛋白质 你加0.1%的三氟乙酸看看，可能效果会好些！大分子蛋白质建议用SB-300柱 小分子肽类用ODS-A柱！这是我的经验，希望有所帮助 ！

我用C18柱做的时候加0.1%三氟乙酸的，加了后pH值很低。我现在是要在保持蛋白活性的前提下做，所以用凝胶柱分离，流动相采用的磷酸盐，可是分离效果很不理想，不知道你是否做过此类实验，或者是是否有其他的建议？谢谢！
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5楼2011-03-30 08:29:33
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lanshunzi

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
lstt09nk(金币+3): 感谢分享经验 2011-03-30 13:26:23
lsx08(金币+3): 谢谢交流 2011-03-30 14:35:29
silicare(EPI+1): 2011-04-20 18:04:54
用凝胶柱分离是很好的。如果极性很大的话 流动相可以是水 我们基本都是用水冲的柱子 我们用的都是sephadex G系列的凝胶，sephadex A是阴离子交换凝胶 我们是用tris-Hcl PH8.8 +不同浓度的氯化钠洗脱，感觉效果不错！仅供参考！
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6楼2011-03-30 13:03:46
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江南

金虫 (正式写手)
★ ★
lsx08(金币+2): 谢谢你的建议！ 2011-03-31 09:30:01
silicare(金币+2): 可行 2011-04-20 18:05:05
如果要保持活性的话首选分子筛和离子交换层析，两者可以组合使用，如果有目的蛋白的抗体的话，还可以用亲和层析。不知道楼主的蛋白有何特性，每种蛋白的分离都是不一样的。
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7楼2011-03-30 20:59:38
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lsx08

新虫 (初入文坛)
有没有虫友知道做蛋白分离外包实验的实验啊？
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8楼2011-03-31 13:22:18
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renruntan

禁虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
lsx08(金币+1): 谢谢回帖！ 2011-04-20 08:52:24
本帖内容被屏蔽
9楼2011-04-19 14:32:42
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
lsx08(金币+2): 谢谢回帖！ 2011-04-20 08:49:17
给我的印象是楼主现在只想用HPLC，后面的人推荐楼主用FPLC，但是具体楼主有多少根柱也不知道，分离野生还是重组蛋白质也不知道，还有没有其它柱也不知道。
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10楼2011-04-19 14:48:17
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lsx08

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-04-19 14:48:17:
给我的印象是楼主现在只想用HPLC，后面的人推荐楼主用FPLC，但是具体楼主有多少根柱也不知道，分离野生还是重组蛋白质也不知道，还有没有其它柱也不知道。

我现在是想用HPLC分离，一根凝胶柱，一根C18蛋白柱，不过请别人尝试了好多根凝胶柱了，分离效果不是很好，我的样品是从蛋清提取的。因为想在保持蛋白活性的前提下做，所以选用凝胶柱分离。
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11楼2011-04-20 08:48:21
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我目前在AKTA上用过离子交换柱、疏水层析柱、凝胶过滤柱，但是没有用过C18，所以也不知道你们实验室还有没有其它层析柱，你的蛋白质适不适合用其它层析柱，如果有，不知道可不可以尝试一下。
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12楼2011-04-20 16:48:24
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xuguanghai

木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
lsx08(金币+2): 谢谢指导！ 2011-04-21 08:28:08
要保持活性，首选亲和层析柱，个人观点
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13楼2011-04-20 17:04:16
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mingge

银虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
14楼2013-10-09 11:34:29
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