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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于Q柱分离蛋白的问题~高手帮帮忙~
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lxyyzz

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于Q柱分离蛋白的问题~高手帮帮忙~ 已有3人参与

用Q柱分离两个蛋白，PH7.4缓冲，目标蛋白等电点8.2，杂蛋白等电点6.4，想让目标蛋白走穿过。
实际做出来的结果上样以后出的峰很平很宽，按柱体积来算走了有30个柱体积了，这种情况正常吗？
望高手解答！
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1楼 2010-10-22 17:02:12
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月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★
lstt09nk(金币+2):鼓励下， 2010-10-22 19:04:38
lxyyzz(金币+3):谢谢。我是新手，想问你一下一些细节的问题，比如蛋白上样浓度，流速。另外你说的没有达到预期目的是分不出来吗？方便的话给我留个邮箱或者QQ交流一下~ 2010-10-22 20:00:06
我曾经多次试验想通过杂蛋白挂柱目的蛋白穿透的方法，但是都没有达到预期的目的。不过一个师兄用的很不错。  这种方法给我的感觉是如果你尝试出来条件了，用起来也不错，使不出来那就是不太合适了。

对于楼主的情况建议使用S柱纯化，理论上讲你的这种情况目的蛋白挂柱，杂蛋白穿透。
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2楼2010-10-22 19:03:10
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月月大可

木虫 (著名写手)
★
dhd997(金币+1):说的对，热心鼓励。 2010-10-23 13:37:44
邮箱不怎么看，还是在这个小木虫这个平台交流吧，这样能看到的人多一些，互相学习。
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3楼2010-10-23 13:30:43
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gdxinlan

禁虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-23 15:14:08
lxyyzz(金币+1):谢谢！ 2010-10-23 16:40:28
本帖内容被屏蔽
4楼2010-10-23 14:04:19
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-23 15:14:17
lxyyzz(金币+1):谢谢。我下次用等电点沉淀试一下看看能不能让杂蛋白少一些 2010-10-23 16:40:56
先用等电点沉淀杂质蛋白质，肯定是不能完全沉淀的，而且目的蛋白质也会有些损失。然后上柱，连续线性洗脱，不用非连续线性洗脱，可能会分得开。

理论上可以的事情实际上还要摸索一番才能比较接近理论值，我最近也正烦。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2010-10-23 14:18:29
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lxyyzz

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-10-23 13:30:43:
邮箱不怎么看，还是在这个小木虫这个平台交流吧，这样能看到的人多一些，互相学习。

你们一般蛋白上样浓度时多少？流速一般控制在多少？
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6楼2010-10-23 16:42:59
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月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):活跃，鼓励。 2010-10-24 08:41:53
我使用多是预装柱使用AKTA蛋白纯化系统，1ml的S柱一般使用1ml/min流速；如果是6ml的大柱子就是用5ml/min的流速。

很少去在意蛋白的浓度，更多的是关注该柱子蛋白的承载量，不要超过承载量，否则目的蛋白就穿透了。

师兄使用的是自己装的柱子，貌似他的流速是2ml/min。
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7楼2010-10-23 23:58:11
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hinge1001

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
因为是流穿，目标蛋白自然不会有明显的出峰，这个很正常吧
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8楼2012-05-31 15:21:56
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