应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于Q柱分离蛋白的问题~高手帮帮忙~
81/1返回列表
查看: 1444  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lxyyzz

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于Q柱分离蛋白的问题~高手帮帮忙~ 已有3人参与

用Q柱分离两个蛋白，PH7.4缓冲，目标蛋白等电点8.2，杂蛋白等电点6.4，想让目标蛋白走穿过。
实际做出来的结果上样以后出的峰很平很宽，按柱体积来算走了有30个柱体积了，这种情况正常吗？
望高手解答！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-10-22 17:02:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★
lstt09nk(金币+2):鼓励下， 2010-10-22 19:04:38
lxyyzz(金币+3):谢谢。我是新手，想问你一下一些细节的问题，比如蛋白上样浓度，流速。另外你说的没有达到预期目的是分不出来吗？方便的话给我留个邮箱或者QQ交流一下~ 2010-10-22 20:00:06
我曾经多次试验想通过杂蛋白挂柱目的蛋白穿透的方法，但是都没有达到预期的目的。不过一个师兄用的很不错。  这种方法给我的感觉是如果你尝试出来条件了，用起来也不错，使不出来那就是不太合适了。

对于楼主的情况建议使用S柱纯化，理论上讲你的这种情况目的蛋白挂柱，杂蛋白穿透。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-10-22 19:03:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)
★
dhd997(金币+1):说的对，热心鼓励。 2010-10-23 13:37:44
邮箱不怎么看，还是在这个小木虫这个平台交流吧，这样能看到的人多一些，互相学习。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-10-23 13:30:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gdxinlan

禁虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-23 15:14:08
lxyyzz(金币+1):谢谢！ 2010-10-23 16:40:28
本帖内容被屏蔽
4楼2010-10-23 14:04:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-23 15:14:17
lxyyzz(金币+1):谢谢。我下次用等电点沉淀试一下看看能不能让杂蛋白少一些 2010-10-23 16:40:56
先用等电点沉淀杂质蛋白质，肯定是不能完全沉淀的，而且目的蛋白质也会有些损失。然后上柱，连续线性洗脱，不用非连续线性洗脱，可能会分得开。

理论上可以的事情实际上还要摸索一番才能比较接近理论值，我最近也正烦。
赞一下(1人) 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2010-10-23 14:18:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxyyzz

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-10-23 13:30:43:
邮箱不怎么看，还是在这个小木虫这个平台交流吧，这样能看到的人多一些，互相学习。

你们一般蛋白上样浓度时多少？流速一般控制在多少？
赞一下 回复此楼
6楼2010-10-23 16:42:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):活跃，鼓励。 2010-10-24 08:41:53
我使用多是预装柱使用AKTA蛋白纯化系统，1ml的S柱一般使用1ml/min流速；如果是6ml的大柱子就是用5ml/min的流速。

很少去在意蛋白的浓度，更多的是关注该柱子蛋白的承载量，不要超过承载量，否则目的蛋白就穿透了。

师兄使用的是自己装的柱子，貌似他的流速是2ml/min。
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2010-10-23 23:58:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hinge1001

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
因为是流穿，目标蛋白自然不会有明显的出峰，这个很正常吧
赞一下 回复此楼
8楼2012-05-31 15:21:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lxyyzz 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 311求调剂 +4 冬十三 2026-03-18 4/200 2026-03-18 21:47 by 尽舜尧1
[考研] 271材料工程求调剂 +4 .6lL 2026-03-18 4/200 2026-03-18 20:05 by 楤哥
[考研] 311求调剂 +6 26研0 2026-03-15 6/300 2026-03-18 14:43 by haxia
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +6 慕寒mio 2026-03-16 6/300 2026-03-18 14:26 by 007_lilei
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +6 薛云鹏 2026-03-13 6/300 2026-03-18 14:14 by 脱颖而出
[考博] 环境领域全国重点实验室招收博士1-2名 +3 QGZDSYS 2026-03-13 5/250 2026-03-18 11:13 by QGZDSYS
[考研] 生物学071000 329分求调剂 +3 我爱生物生物爱� 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:12 by macy2011
[考研] 0703化学336分求调剂 +6 zbzihdhd 2026-03-15 7/350 2026-03-18 09:53 by zhukairuo
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] 268求调剂 +8 一定有学上- 2026-03-14 9/450 2026-03-17 17:47 by laoshidan
[考研] 278求调剂 +3 Yy7400 2026-03-13 3/150 2026-03-17 08:24 by laoshidan
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 20:51 by 元子^0^
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 一志愿华中师范071000，325求调剂 +6 RuitingC 2026-03-12 6/300 2026-03-16 14:50 by 可淡不可忘
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考研] 本科南京大学一志愿川大药学327 +3 麦田耕者 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:04 by 外星文明
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭