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lxyyzz

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于Q柱分离蛋白的问题~高手帮帮忙~已有3人参与

用Q柱分离两个蛋白,PH7.4缓冲,目标蛋白等电点8.2,杂蛋白等电点6.4,想让目标蛋白走穿过。
实际做出来的结果上样以后出的峰很平很宽,按柱体积来算走了有30个柱体积了,这种情况正常吗?
望高手解答!
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月月大可

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):活跃,鼓励。 2010-10-24 08:41:53
我使用多是预装柱使用AKTA蛋白纯化系统,1ml的S柱一般使用1ml/min流速;如果是6ml的大柱子就是用5ml/min的流速。

很少去在意蛋白的浓度,更多的是关注该柱子蛋白的承载量,不要超过承载量,否则目的蛋白就穿透了。

师兄使用的是自己装的柱子,貌似他的流速是2ml/min。
7楼2010-10-23 23:58:11
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月月大可

木虫 (著名写手)

★ ★
lstt09nk(金币+2):鼓励下, 2010-10-22 19:04:38
lxyyzz(金币+3):谢谢。我是新手,想问你一下一些细节的问题,比如蛋白上样浓度,流速。另外你说的没有达到预期目的是分不出来吗?方便的话给我留个邮箱或者QQ交流一下~ 2010-10-22 20:00:06
我曾经多次试验想通过杂蛋白挂柱目的蛋白穿透的方法,但是都没有达到预期的目的。不过一个师兄用的很不错。  这种方法给我的感觉是如果你尝试出来条件了,用起来也不错,使不出来那就是不太合适了。

对于楼主的情况建议使用S柱纯化,理论上讲你的这种情况目的蛋白挂柱,杂蛋白穿透。
2楼2010-10-22 19:03:10
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月月大可

木虫 (著名写手)


dhd997(金币+1):说的对,热心鼓励。 2010-10-23 13:37:44
邮箱不怎么看,还是在这个小木虫这个平台交流吧,这样能看到的人多一些,互相学习。
3楼2010-10-23 13:30:43
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gdxinlan

禁虫 (正式写手)


dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-23 15:14:08
lxyyzz(金币+1):谢谢! 2010-10-23 16:40:28
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4楼2010-10-23 14:04:19
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