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lxyyzz

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于Q柱分离蛋白的问题~高手帮帮忙~已有3人参与

用Q柱分离两个蛋白,PH7.4缓冲,目标蛋白等电点8.2,杂蛋白等电点6.4,想让目标蛋白走穿过。
实际做出来的结果上样以后出的峰很平很宽,按柱体积来算走了有30个柱体积了,这种情况正常吗?
望高手解答!
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月月大可

木虫 (著名写手)


dhd997(金币+1):说的对,热心鼓励。 2010-10-23 13:37:44
邮箱不怎么看,还是在这个小木虫这个平台交流吧,这样能看到的人多一些,互相学习。
3楼2010-10-23 13:30:43
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月月大可

木虫 (著名写手)

★ ★
lstt09nk(金币+2):鼓励下, 2010-10-22 19:04:38
lxyyzz(金币+3):谢谢。我是新手,想问你一下一些细节的问题,比如蛋白上样浓度,流速。另外你说的没有达到预期目的是分不出来吗?方便的话给我留个邮箱或者QQ交流一下~ 2010-10-22 20:00:06
我曾经多次试验想通过杂蛋白挂柱目的蛋白穿透的方法,但是都没有达到预期的目的。不过一个师兄用的很不错。  这种方法给我的感觉是如果你尝试出来条件了,用起来也不错,使不出来那就是不太合适了。

对于楼主的情况建议使用S柱纯化,理论上讲你的这种情况目的蛋白挂柱,杂蛋白穿透。
2楼2010-10-22 19:03:10
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gdxinlan

禁虫 (正式写手)


dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-23 15:14:08
lxyyzz(金币+1):谢谢! 2010-10-23 16:40:28
本帖内容被屏蔽

4楼2010-10-23 14:04:19
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶


dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-23 15:14:17
lxyyzz(金币+1):谢谢。我下次用等电点沉淀试一下看看能不能让杂蛋白少一些 2010-10-23 16:40:56
先用等电点沉淀杂质蛋白质,肯定是不能完全沉淀的,而且目的蛋白质也会有些损失。然后上柱,连续线性洗脱,不用非连续线性洗脱,可能会分得开。

理论上可以的事情实际上还要摸索一番才能比较接近理论值,我最近也正烦。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2010-10-23 14:18:29
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