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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】做western一抗不好用怎么办？
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kebo050551

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】做western一抗不好用怎么办？ 已有4人参与

实验室以前自己做的抗体，不太好用，出现很多杂带，背景高（二抗也不太好用），目的条带经常出 不来，分子量20kd左右。大家有什么办法能去除背景，又能把目的条带压出来的好办法吗？
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1楼 2011-03-15 12:12:48
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
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Originally posted by kebo050551 at 2011-03-15 12:12:48:
实验室以前自己做的抗体，不太好用，出现很多杂带，背景高（二抗也不太好用），目的条带经常出 不来，分子量20kd左右。大家有什么办法能去除背景，又能把目的条带压出来的好办法吗？

那人家以前做的人检查的效果好么？是不是人家也有做出这么杂带呢？是否抗体未经纯化呢？
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52187644
2楼2011-03-15 12:29:12
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wudiguigui99

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-03-15 19:37:07
自己做的一抗很可能效果不好的
可以先纯化下抗体
然后洗膜的时候用0.3TBST
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3楼2011-03-15 13:50:45
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kebo050551

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by dianaofyezi at 2011-03-15 12:29:12:
那人家以前做的人检查的效果好么？是不是人家也有做出这么杂带呢？是否抗体未经纯化呢？

抗体量不是很多，所以也 不好做纯化，抗体好像是没做过纯化，是以前师兄做的，抗体呈红色。
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4楼2011-03-17 12:23:12
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kebo050551

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by dianaofyezi at 2011-03-15 12:29:12:
那人家以前做的人检查的效果好么？是不是人家也有做出这么杂带呢？是否抗体未经纯化呢？

抗体量不是很多，所以也 不好做纯化，抗体好像是没做过纯化，是以前师兄做的，抗体呈红色。
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5楼2011-03-17 12:23:32
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kebo050551

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by wudiguigui99 at 2011-03-15 13:50:45:
自己做的一抗很可能效果不好的
可以先纯化下抗体
然后洗膜的时候用0.3TBST

以前师兄做有条带，但是我怀疑分子量不对，我曾经做出来过，就一条带，但是分子量不对。
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6楼2011-03-17 12:24:44
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lavender169

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你师兄真牛 还自己做抗体
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::::::::::::::::jusmine:::::::::::::::
7楼2011-03-29 15:56:31
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