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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 一抗效价测定（western）
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落枫林

无虫 (初入文坛)

[求助] 一抗效价测定（western）

最近纯化了一个抗体，用来做western一抗的。所以想摸一下它的效价，顺便跟买了的一抗做个对比。这个实验怎么设计好呢？求有经验的朋友帮帮忙！
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1楼 2011-09-29 10:28:50
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weigb503

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~~ 2011-09-29 13:30:32
你是只想检测纯化抗体已买的抗体比较吗，那我建议你做间接elisa检测就可以了，在稀释抗体时候做一个等倍梯度稀释就好了，然后看你纯化抗体与买的抗体的比较，看一下你梯度稀释结果就好了，毕竟WB检测做梯度耗时间好钱，做ELISA检测快速简单，比较好以后就可以选择一个合适的稀释度进行WB试验了，祝楼主试验成功。
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2楼2011-09-29 10:36:35
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落枫林

无虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by weigb503 at 2011-09-29 10:36:35:
你是只想检测纯化抗体已买的抗体比较吗，那我建议你做间接elisa检测就可以了，在稀释抗体时候做一个等倍梯度稀释就好了，然后看你纯化抗体与买的抗体的比较，看一下你梯度稀释结果就好了，毕竟WB检测做梯度耗时间 ...

Elisa的话要重新制备抗原，只有加过loding的抗原了。同时我还要摸索该抗体做western的最适稀释倍数。所以还是想直接做western
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3楼2011-09-29 11:01:47
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weigb503

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
落枫林(金币+4): 2011-09-29 11:23:42
adslye(金币+2): 很热心~鼓励~ 2011-09-29 13:30:43
好像没有直接通过WB来检测纯化抗体效价的，我没有做过，不过WB检测纯化抗体我们一般选择1:1000，那建议你做一个1:1000,1:5000,1:10000三个梯度比较，然后等wb结果出来以后再细化梯度范围。祝楼主实验成功。
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4楼2011-09-29 11:11:43
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