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wsz2056

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】重组 质粒在BL21表达 已有8人参与

重组质粒,为什么在BL21 中表达不出来,IPTG1M,终浓度0.5,诱导时间过夜,温度20-25度个不等 ,但是就是不表达。
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最爱花诗雨

金虫 (正式写手)

穷鬼


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
具体什么原因不是很清楚
只是给点建议吧,你的IPTG的0.5单位是什么?这个东西浓度不能太高,一般作为具有lac或tac等启动子的表达载体的表达诱导物使用。
还有就是你的培养温度为什么那么低呢?这样的温度可以时间再稍微长点
严于律己,宽以待人
5楼2011-03-14 19:17:50
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chenshuai1238

金虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
对质粒进行鉴定了吗?重组是否成功?
2楼2011-03-14 16:20:37
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不表达的因素很多,如ORF、密码子偏爱性等等。
3楼2011-03-14 16:28:59
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qjy_134

铜虫 (小有名气)


★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1): 鼓励交流 2011-03-14 17:57:04
先用Rosetta 试一下,如果还不行就换个载体。
4楼2011-03-14 17:20:25
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