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【求助/交流】植物组织双向电泳样品制备方法及注意事项 已有2人参与
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如题，想知道制备蛋白样品时材料必须是现采现用么？如果冷冻在-80度冰箱几天用时再拿出来用液氮磨样可以么？会不会有太大影响呢？ 知道情况的大侠说下吧，谢谢啦~~~~~~~~~ |
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谢谢回帖，做蛋白方面的实验好费钱费力，正在纠结要不要继续做下去呢。。。不过你的回复还是对我有一定帮助的，谢谢！ 
3楼2011-03-15 15:06:36
xhjggl
木虫 (正式写手)
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可以，但是如果植物中含有较多的二级次生产物，建议在做2D前，对样品进行清洁 上海生工有试剂可以用 非干扰型蛋白浓度测定试剂盒 Non-Interference Protein Assay Kit 产品说明: 非干扰型蛋白质定量试剂盒是排除决大多数实验室常规试剂的干扰的光学定量方法，它可以去除离子，非离子，两性去污试剂，还原试剂，螯合试剂，载体两性电解质，Tris ，糖，尿素，硫尿，盐酸胍等变性试剂，对于在Laemmeli buffer等蛋白质上样缓冲液，2D sample extraction buffer,高浓度的β-mercaptoethanol (<15%) ,脂质体中的蛋白质也可以定量,蛋白质量在0.5-50µg 之间有良好的线性关系,需要的样品体积在1-50µl ,特殊的沉淀试剂可以去除掉绝大多数干扰物质,被沉淀的蛋白质与含有铜的碱性物质相混合,未与蛋白质相结合铜在被还原为一价后与特定的生色试剂反应,产生特定的480nm吸收波长,所以随着蛋白质的浓度增加,,未与蛋白质结合铜相应减少,这样特定的吸收波长的吸收值与溶液中的蛋白质浓度成反比,这种蛋白质定量方法不受氨基酸副链和蛋白质的种类的影响，本试剂盒可以做250次微量定量。 产品特点： 1．整个实验过程大约只需要40分钟左右; 2．定量过程不受到非蛋白的去污试剂，还原试剂，螯合试剂，Tris ，糖，尿素，硫尿等变性试剂，载体两性电解质，化学药品，抗生素等的影响; 3．定量范围在0.5-50µg，只需要1-50ul的样品; 4．比较适合于对2D电泳用的细胞或组织裂解液所提取的蛋白样品直接进行定量。 编号 包装 价格 产地 SK3071 250 Assays 500 生工 Perfect-FOCUS™ 2D电泳样品清除试剂 Description: Perfect-FOCUS™ is designed to clean and concentrate protein samples that give poor protein spot resolution during 2D electrophoresis. Protein samples containing interfering agents, including ionic detergents, metal ions, substrates, substrate analogs, inhibitors, and other charged molecules, routinely result in smeared or low resolution gels.Protein solutions are treated with Perfect-FOCUS™ that quantitatively precipitates the proteins, which are subsequently collected by centrifugation. The non-protein interfering agents are washed away and the protein pellet is ready to be solubilized in an appropriate sample loading buffer.The collected protein has conductivity <50µS and is substantially free from non-protein agents, which improves spot resolution and greatly reduces spot streaking.Perfect-FOCUS™ treated protein samples are compatible with mass spectrometry analysis and show identical peptide spectra.Store：18～25℃。 Features: Removes interfering agents from protein solutions.;Conductivity lower than 50µS after treatment.;Samples free from non-protein agents;Treated samples suitable for running 2D gels;the Kit suitable for 50 x 1-100µl protein solutions. suitable for concentrating and cleaning protein samples for isoelectric focusing (IEF) and 2D-gel electrophoresis applications. 编号 包装 价格 产地 786-124 50 Assays 1925 G Bios 2D 电泳样品提取缓冲液系列 产品简介： 本系列以尿素为基础的2D电泳样品提取液，是以干性尿素和其它非离子，两性去污试剂为基础，外加一定体积的水化液构成，含有尿素的溶液在温度过高（>37℃）和高PH值会的情况下造成分解，而温度过低可能造成析出，同时尿素就会在溶液体系中逐步和氰酸铵达成一定的平衡，异氰酸会与蛋白质的N末端、赖氨酸、精氨酸的氨基以及半胱氨酸的巯基发生氨甲酰化反应。所以在进行2D电泳样品提取时，采用新鲜的以尿素为基础的2D电泳样品提取液，有很重要的意义，本系列水化后,可以产生50ml的提取试剂，本系列溶解液对疏水性蛋白质的溶解能力，由弱到强，可以根据您样品的特性，选择使用合适的2D电泳样品提取缓冲液,同时本系列试剂也可以用于对IPG Strips的水化。 产品组成： PL037 Extraction buffer I : Urea powder,diluent ：NP-40 PL038 Extraction buffer II: Urea powder, diluent ：CHAPS PL039 Extraction buffer III: Urea ,Thiourea powder, diluent:CHAPS PL 040 Extraction buffer IV: Urea ,Thiourea ,ASB-16 powder, diluent:CHAPS PL041 Extraction buffer V: Urea ,Thiourea ,SB3-10 powder , diluent:CHAPS PL042 Extraction buffer VI: Urea ,Thiourea , NDSB201 powder, diluent: CHAPS 运输和储存： 在常温下运输，干粉4度保使用方法： 1． 根据实验的样本数，称量出一定克数的干粉，对于Extraction buffer I，II和III ，按照每克干粉加入1.15ml 的稀释液；对于Extraction buffer IV，V和VI，按照每克干粉加入1.ml 的稀释液。 2． 根据实验的要求，加入一定量的还原试剂，蛋白酶抑制试剂，载体两性电解质，溴酚蓝等。 3． 在涡旋震荡器上，充分震荡，直到形成均一，透明的溶液。对于Extraction buffer V，需要30度，水浴10分钟左右，以促进溶解。 4． 对于没有使用完的溶液，请分装，-70度保存，并且尽量在一个月内使用完。 5．取一支1.5ml 的离心管，加入如下的细胞或组织：100mg动物组织或107个培养的细胞；经过酶消化去除细胞壁的50mg湿重的酵母；50ul的昆虫细胞沉淀；50mg细菌；加入500ul 的新鲜的溶解液，经过超声破碎，每次30 S ， 5～6次，每次间隔1 min：或100mg植物组织经过液氮研磨，加入500ul 的新鲜的溶解液。将经过以上步骤处理的在离心管中的细胞或组织震荡10分钟，室温12000rpm 离心10分钟离心取上清。 6. 沉淀的细胞碎片或组织可以再加入50-100ul 的新鲜的溶解液，震荡10分钟后，室温12000rpm 离心10分钟后取上清。 7．合并操作步骤5-6中的上清，用于2D电泳。 存，稀释液常温保存,保质期 一年。 |
2楼2011-03-10 22:55:43
