| 查看: 2804 | 回复: 23 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
【求助/交流】pGEM-T Easy载体 T-A 连接 为啥没连入PCR产物的 菌斑是蓝斑
|
|||
| T载体如果不跟PCR产物连接， 不是由于T末端，自己不能自连吗? 这样不应该lacZ基因中间断裂 不能表达吗? 为什么没有连接PCR产物的菌班是蓝色的呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
二苄基磷酰氯，磷酸接酚羟基，
已经有11人回复
-
二苄基磷酰氯，磷酰氯
已经有10人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有53人回复
-
酸酐或者羧酸酰氯化
已经有15人回复
-
酚羟基接入磷酸，磷酸酯化
已经有26人回复
-
土壤中可溶性有机碳种类
已经有1人回复
-
韩国海关检测食用植物油中的苯并芘用的是哪种方法？
已经有0人回复
-
现有pP43NMK质粒，想换了pHT43，或者其他芽孢杆菌过表达质粒
已经有5人回复
-
请教脂质体包裹miRNA
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 分子生物学PCR
已经有81人回复
- 什么细菌可以抑制霉菌的生长呀？
已经有15人回复
- 那些大肠杆菌感受态是Dam+型，基因可被DpnI降解
已经有6人回复
- 固体琼脂平板为啥倒置培养呀？来个专业的解答，大家讨论讨论
已经有27人回复
- 两个基因融合构建真核表达载体需要去掉信号肽吗?
已经有7人回复
- tail-PCR问题，求指导
已经有9人回复
- PCR退火温度态度会导致扩增不出目的条带么？
已经有4人回复
- pcr 带好宽啊!苦恼，求助ing!
已经有21人回复
- 普鲁兰做药物载体
已经有7人回复
- PCR植物基因组DNA，为什么就一直P不出来捏
已经有34人回复
- 求助：约6kb质粒做模板的pcr程序怎么设定啊
已经有12人回复
- 相同条件的pcr产物，跑出不同的条带，是什么原因[/img][/img][/img]
已经有12人回复
- PCR-DGGE技术寻求
已经有9人回复
- T载体连接目的片段后做蓝白斑全都是假阳性
已经有6人回复
- 【求助/交流】连到pGEM-T载体上的PCR回收产物，提质粒后还需要做酶切验证吗？
已经有13人回复
- 【求助/交流】为什么我的PCR产物总是连接不上T载体
已经有26人回复
- 【求助/交流】PCR产物与T载体的连接的实验原理？
已经有5人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
化学空间-西安交大校企研发团队诚聘博后/科研助理（多个岗位）
+4/908
-
征男友，诚征结婚对象，坐标广州
+1/260
-
#重庆本地女生，诚征男友# 最后一次发帖了
+5/242
-
苦等大半年的省自然科学基金已拟立项公示
+5/200
-
化学合成无小事，惰性环境要求高！
+1/89
-
2024暑期夏令营招生【西北工业大学翱翔领军团队倪骏康特任研究员招生】
+1/86
-
坐标北京，征女友
+1/64
-
上海交大工业催化方向高薪招聘博士后研究员
+1/50
-
复旦大学院士团队诚聘博士后/科研助理
+1/40
-
北京，京津冀，地区征女友
+1/40
-
【急招】上海交通大学化工学院邱惠斌教授课题组招聘博士后
+1/37
-
大湾区大学（筹）张国强课题组招聘光催化方向博士后及特聘研究员
+1/37
-
牧原实验室（郑州）招聘研究人员
+1/30
-
大湾区大学（筹）张国强课题组招聘光催化方向博士后及特聘研究员
+1/30
-
【招聘】四川大学高分子科学与工程学院-仿生医用高分子课题组招收科研助理/硕士/博士
+1/15
-
德国博士职位1个（TU Ilmenau）-4年
+1/9
-
复旦大学化学系凡勇教授团队招聘博士后
+1/9
-
申请2025年博士，可提前开展实验（或进组做科研助理）
+1/8
-
再回首之科研之路
+1/5
-
深圳大学高等研究院暑期夏令营
+1/2
+4/908
18楼2011-04-28 10:44:43
2楼2011-03-07 10:12:02
3楼2011-03-07 10:52:10
★ ★ ★ ★ ★ ★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
看天(金币+5): 鼓励回答！ 2011-03-07 11:21:08
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
看天(金币+5): 鼓励回答！ 2011-03-07 11:21:08
|
如果你们清楚T载体是怎么做出来的，就知道兰斑怎么来的了。 如果真的是两端都是T头，这个T载体是无法自连起来的。 但是为什么会有自连呢？是因为在制作T载体的过程中，除了两头是T的情况，不可避免的会还有一头是T突出，一头是平端（这个残留，但是也无法自连），或者两头是平端，或者是一头是T头，一头是A头，或者干脆就是微量的原始环状质粒无法完全分开，微量的环状原始质粒混在线性T载体成品里面。除了第一种情况一头T头，一头平端无法连接。其它几种情况加连接酶连接后，都会表现出环状的质粒，也就是蓝斑点了。至于为什么会混杂这几种东西，就牵涉到了基础的原理，和方法了，自己去查资料吧。 做T载体的工艺，就是尽可能的做到，全部是两头T头的载体，这样理论上就不会有篮斑了。但是这是不可能的，总会混杂上面几种情况造成蓝斑。混杂越多，蓝斑比例越多。也就是说明了T载体质量越差。这个是判断T载体好坏的一个最重要指标之一。 加T和酶切T载体的方法，没有可能达到100%不混杂上面几种情况。但是本公司做的T载体工艺，蓝色斑点小于10%，很多情况下小于5%，质量已经是达到顶级水平。其它公司很多工艺无法达到，就会出现较多的篮斑，或者两边T头掉了后，两端成了平端破坏读码框自连成白斑的假阳性情况。 |
4楼2011-03-07 11:19:54
简单回复
198612楼
2011-03-07 12:48
回复
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
