应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】反转录过程中的问题
51/1返回列表
查看: 1257  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

Allanflying

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】反转录过程中的问题 已有3人参与

大家好，想问一下高手们，提出来的RNA质量不错，但是如果反转录最后一步，高温使反转录酶失活的反应失败的话，会不会影响我做后续的RT-PCR实验？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-02-15 23:53:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Allanflying

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 翱宇 at 2011-02-16 13:09:49:
楼主只是最后一步反转录酶失活没成功，cDNA应该还是有的，可以扩增基因，其实你可以将你的反应液再扔到70度水浴十分钟也行啊，扩增基因时建议50ul体系使用1ul反应液，以高保真酶扩增！

用我说的cDNA做模板，第一步PCR出来了28SrRNA的内参基因条带，之后设计了10个基因的10对引物，包括属内特异引物，也包括简并引物，但是均没有出现想要的目的条带，郁闷之极，是什么原因啊？
出来内参基因是不是意味着反转录一定成功了啊？
赞一下 回复此楼
6楼2011-03-13 21:32:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1): 谢谢交流 2011-02-16 10:37:28
据我所知    反转录如果失败  就得不到CDNA，没有CDNA的话，你后面的实验是无法进行的。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-02-16 09:35:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

翱宇

禁虫 (正式写手)

将军
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2): good 2011-02-17 11:03:41
楼主只是最后一步反转录酶失活没成功，cDNA应该还是有的，可以扩增基因，其实你可以将你的反应液再扔到70度水浴十分钟也行啊，扩增基因时建议50ul体系使用1ul反应液，以高保真酶扩增！
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-02-16 13:09:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Allanflying

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 翱宇 at 2011-02-16 13:09:49:
楼主只是最后一步反转录酶失活没成功，cDNA应该还是有的，可以扩增基因，其实你可以将你的反应液再扔到70度水浴十分钟也行啊，扩增基因时建议50ul体系使用1ul反应液，以高保真酶扩增！

你说的高保真酶是ExTaq酶吗，如果我想扩的基因只有几百bp的话，就用ExTaq酶50ul体系？
赞一下 回复此楼
4楼2011-02-16 21:35:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料学调剂 +6 提神豆沙包 2026-02-28 6/300 2026-03-01 10:49 by sunny81
[考研] 0856化工专硕求调剂 +5 董boxing 2026-03-01 5/250 2026-03-01 10:41 by sunny81
[考研] 材料284求调剂，一志愿郑州大学英一数二 +4 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:39 by 江科大李老师
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业，申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[考研] 高分子化学与物理调剂 +4 好好好1233 2026-02-28 8/400 2026-03-01 09:26 by 好好好1233
[考研] 272求调剂 +4 材紫有化 2026-02-28 4/200 2026-03-01 09:20 by L135790
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 284求调剂 +5 天下熯 2026-02-28 5/250 2026-03-01 08:49 by ms629
[考研] 298求调剂 +5 axyz3 2026-02-28 5/250 2026-03-01 06:45 by 刘兵
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 化工专硕348，一志愿985求调剂 +4 弗格个 2026-02-28 6/300 2026-02-28 22:00 by wang_dand
[考研] 295求调剂 +5 19171856320 2026-02-28 5/250 2026-02-28 21:39 by gaoxiaoniuma
[考博] 26申博 +4 想申博！ 2026-02-26 4/200 2026-02-28 21:37 by limorning
[考研] 311求调剂 +8 南迦720 2026-02-28 8/400 2026-02-28 21:30 by gaoxiaoniuma
[考研] 求调剂 +4 repeatt?t 2026-02-28 4/200 2026-02-28 21:16 by gaoxiaoniuma
[考研] 0856材料求调剂 +10 hyf hyf hyf 2026-02-28 11/550 2026-02-28 18:50 by 无际的草原
[考研] 0856调剂 +3 刘梦微 2026-02-28 3/150 2026-02-28 13:22 by houyaoxu
[考研] 304求调剂 +5 曼殊2266 2026-02-28 6/300 2026-02-28 12:44 by 迷糊CCPs
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭