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金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】反转录过程中的问题已有3人参与

大家好，想问一下高手们，提出来的RNA质量不错，但是如果反转录最后一步，高温使反转录酶失活的反应失败的话，会不会影响我做后续的RT-PCR实验？

1楼 2011-02-15 23:53:13

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金虫 (小有名气)

引用回帖:

Originally posted by 翱宇 at 2011-02-16 13:09:49:
楼主只是最后一步反转录酶失活没成功，cDNA应该还是有的，可以扩增基因，其实你可以将你的反应液再扔到70度水浴十分钟也行啊，扩增基因时建议50ul体系使用1ul反应液，以高保真酶扩增！

你说的高保真酶是ExTaq酶吗，如果我想扩的基因只有几百bp的话，就用ExTaq酶50ul体系？

4楼2011-02-16 21:35:31

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金虫 (小有名气)

引用回帖:

用我说的cDNA做模板，第一步PCR出来了28SrRNA的内参基因条带，之后设计了10个基因的10对引物，包括属内特异引物，也包括简并引物，但是均没有出现想要的目的条带，郁闷之极，是什么原因啊？
出来内参基因是不是意味着反转录一定成功了啊？

6楼2011-03-13 21:32:31

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