应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】反转录过程中的问题
61/1返回列表
查看: 1270  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Allanflying

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】反转录过程中的问题 已有3人参与

大家好，想问一下高手们，提出来的RNA质量不错，但是如果反转录最后一步，高温使反转录酶失活的反应失败的话，会不会影响我做后续的RT-PCR实验？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-02-15 23:53:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1): 谢谢交流 2011-02-16 10:37:28
据我所知    反转录如果失败  就得不到CDNA，没有CDNA的话，你后面的实验是无法进行的。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-02-16 09:35:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

翱宇

禁虫 (正式写手)

将军
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2): good 2011-02-17 11:03:41
楼主只是最后一步反转录酶失活没成功，cDNA应该还是有的，可以扩增基因，其实你可以将你的反应液再扔到70度水浴十分钟也行啊，扩增基因时建议50ul体系使用1ul反应液，以高保真酶扩增！
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-02-16 13:09:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Allanflying

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 翱宇 at 2011-02-16 13:09:49:
楼主只是最后一步反转录酶失活没成功，cDNA应该还是有的，可以扩增基因，其实你可以将你的反应液再扔到70度水浴十分钟也行啊，扩增基因时建议50ul体系使用1ul反应液，以高保真酶扩增！

你说的高保真酶是ExTaq酶吗，如果我想扩的基因只有几百bp的话，就用ExTaq酶50ul体系？
赞一下 回复此楼
4楼2011-02-16 21:35:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

翱宇

禁虫 (正式写手)

将军
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2): 热心。 2011-02-17 11:03:53
引用回帖:
Originally posted by Allanflying at 2011-02-16 21:35:31:

你说的高保真酶是ExTaq酶吗，如果我想扩的基因只有几百bp的话，就用ExTaq酶50ul体系？

我一般用KOD-plus，68度延伸的一个酶，不管要扩增的基因多长，50ul后可以跑回收胶回收，进行后续克隆操作！
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-02-16 22:04:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Allanflying

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 翱宇 at 2011-02-16 13:09:49:
楼主只是最后一步反转录酶失活没成功，cDNA应该还是有的，可以扩增基因，其实你可以将你的反应液再扔到70度水浴十分钟也行啊，扩增基因时建议50ul体系使用1ul反应液，以高保真酶扩增！

用我说的cDNA做模板，第一步PCR出来了28SrRNA的内参基因条带，之后设计了10个基因的10对引物，包括属内特异引物，也包括简并引物，但是均没有出现想要的目的条带，郁闷之极，是什么原因啊？
出来内参基因是不是意味着反转录一定成功了啊？
赞一下 回复此楼
6楼2011-03-13 21:32:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Allanflying 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 269专硕求调剂 +6 金恩贝 2026-03-21 6/300 2026-03-22 14:31 by ColorlessPI
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +4 NIFFFfff 2026-03-20 4/200 2026-03-22 09:49 by 2026paper
[考研] 工科0856求调剂 +3 沐析汀汀 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:30 by 学员8dgXkO
[考研] 297求调剂 +11 戏精丹丹丹 2026-03-17 12/600 2026-03-21 17:47 by ColorlessPI
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-20 7/350 2026-03-21 16:36 by barlinike
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业（081702）315分求调剂 +12 yangfz 2026-03-17 12/600 2026-03-21 03:30 by JourneyLucky
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +4 llllkkkhh 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:24 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中科技大学，080502，354分求调剂 +5 守候夕阳CF 2026-03-18 5/250 2026-03-21 01:06 by JourneyLucky
[考研] 274求调剂 +10 S.H1 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:51 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕英一数二306 +7 z1z2z3879 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:48 by JourneyLucky
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂求学校推荐 +3 伯乐29 2026-03-18 5/250 2026-03-20 22:59 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
[考研] 0856调剂，是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭