应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】如何降低，多克隆抗体非特异性？
51/1返回列表
查看: 2857  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

未知树

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】如何降低，多克隆抗体非特异性？ 已有7人参与

制备了一种多抗，但是，在进行细胞内免疫荧光实验时，非特异性非常非常的强，几乎与实验组无法区分。

制备过程：
1，克隆目的基因至表达载体pMal-C4x。
2，表达纯化目的蛋白。X-MBP（带有MBP标签的融合蛋白）
3，纯化融合蛋白X-MBP，很纯！
4，注射新西兰大白兔。
5，收集血清。


PS： 注射大白兔之前，没有切除标签蛋白MBP（约42KDa）.
在western blot试验中， 该抗体的特异性非常好。 但是， 当用于细胞实验室时， 非特异性出奇的高， 实验组和对照组， 一模一样， 几乎看不出任何区别。

在网上查看看了一些方法， 仍然不是太明白。

如何才能有效地降低特异性。  
请各位虫友支招，万分感谢~
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

金、磁珠与抗体的结合

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
每一天都是一个新的起点
1楼 2011-02-14 22:40:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+5): good 2011-02-15 14:11:36
1、用你纯化的重组蛋白偶联制作亲和层析介质，然后进行亲和纯化。
2、设计多肽免疫。
3、非融合表达目的蛋白。

但不管怎样免疫，用免疫原偶联进行亲和纯化都是需要的。用抗血清效果肯定要差些。
赞一下(2人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

hyanzi9920
生物资源交流QQ群：1044518333
3楼2011-02-15 09:30:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+5): good 2011-02-15 09:29:29
可能原因：
1.多抗是否纯化？去除非特异性的其他蛋白？WB和荧光对抗体的要求是不同的。
2.细胞中是否有其他蛋白与其有交叉反应？
3.阴性对照结果如何，即用同源的抗体进行试验？
赞一下(2人) 回复此楼
52187644
2楼2011-02-15 09:03:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2): 欢迎交流 2011-02-15 14:11:52
免疫荧光对抗体要求很高，都是用单克隆抗体做的吧
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-02-15 14:05:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

未知树

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by snoopyzxx at 2011-02-15 09:30:23:
1、用你纯化的重组蛋白偶联制作亲和层析介质，然后进行亲和纯化。
2、设计多肽免疫。
3、非融合表达目的蛋白。

但不管怎样免疫，用免疫原偶联进行亲和纯化都是需要的。用抗血清效果肯定要差些。

没有啊， 我们实验室的另外一种抗体，就是多抗啊， 是用纯化的病毒粒子，直接注射大白兔得到的。 用的也非常的好啊
赞一下 回复此楼
每一天都是一个新的起点
5楼2011-02-15 17:14:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 考研化学学硕调剂，一志愿985 +3 张vvvv 2026-03-15 5/250 2026-03-16 20:25 by 张vvvv
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +6 zlingli 2026-03-13 6/300 2026-03-15 20:00 by ryzcf
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家，不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] 328求调剂 +3 5201314Lsy！ 2026-03-13 6/300 2026-03-14 15:31 by hyswxzs
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 求调剂，一志愿江南大学环境工程085701 +3 Djdjj12 2026-03-10 4/200 2026-03-14 00:31 by JourneyLucky
[考研] 一志愿湖师大化学289求调剂 +6 XMCMM3.14159 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:28 by JourneyLucky
[考研] 327求调剂 +4 Ffff03 2026-03-10 4/200 2026-03-14 00:17 by JourneyLucky
[考研] 0703化学调剂 +4 快乐的香蕉 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:41 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] 0856材料与化工301求调剂 +5 奕束光 2026-03-13 5/250 2026-03-13 22:00 by 星空星月
[考研] 315求调剂 +9 小羊小羊_ 2026-03-11 10/500 2026-03-13 21:13 by SXNU李老师
[考研] 332求调剂 +3 Zz版 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:36 by 18595523086
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
[考研] 08食品或轻工求调剂，本科发表3篇sci一区top论文，一志愿南师大食品科学与工程 +3 我是一个兵， 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:21 by Yuyi.
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生，2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
[考博] 读博申请 +5 感dd 2026-03-10 7/350 2026-03-11 17:02 by QGZDSYS
[硕博家园] 木虫好像不热闹了，是不是？ +4 偏振片 2026-03-10 4/200 2026-03-10 09:51 by longwave
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭