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猫咪胖胖

新虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】为什么我的PCR产物总是连接不上T载体已有21人参与

我PCR回收得到的片段，与T载体连接后转化摇菌提质粒后可以P出目的条带，但测序总显示是空载体，不知道怎么回事。
PMD-18T和T1-simple都试过。

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1楼2011-02-13 22:23:25

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amilie030312

金虫 (正式写手)

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★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+5): 谢谢交流 2011-02-14 10:25:15

酶切一下，如果切不对，说明你前面酶切的酶有核酸外切酶活性，连接之前的那次酶切就少了几个碱基了，这可能是原因之一，用纯一点的酶。
另外，菌P能出结果不一定就是对的，PCR这东西很难说的，有一点点都能扩增出来，说明不了啥太多的问题。
还有可能是连接的时候手法操作有问题，换个人连接试试看，生物实验这东西有时候是挺邪门的，或者回去睡上三天大觉，回来就都出来了。