24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 4786  |  回复: 26
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

猫咪胖胖

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】为什么我的PCR产物总是连接不上T载体 已有21人参与

我PCR回收得到的片段,与T载体连接后转化摇菌提质粒后可以P出目的条带,但测序总显示是空载体,不知道怎么回事。
PMD-18T和T1-simple都试过。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+5): 谢谢交流 2011-02-14 10:25:15
酶切一下,如果切不对,说明你前面酶切的酶有核酸外切酶活性,连接之前的那次酶切就少了几个碱基了,这可能是原因之一,用纯一点的酶。
另外,菌P能出结果不一定就是对的,PCR这东西很难说的,有一点点都能扩增出来,说明不了啥太多的问题。
还有可能是连接的时候手法操作有问题,换个人连接试试看,生物实验这东西有时候是挺邪门的,或者回去睡上三天大觉,回来就都出来了。
4楼2011-02-14 09:59:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 27 个回答

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

恩,酶切验证最可靠。
Thank-you,so-blue.
3楼2011-02-14 08:45:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
PCR产物去测序啊,还能提高保密性,多好啊。。
5楼2011-02-14 14:01:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

猫咪胖胖

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): 鼓励新虫交流 2011-02-17 11:10:14
测序公司都说没连上,还有必要酶切吗?
我连了好几次都是这样,按理说T载体的连接效率不是很高吗?
唉,不懂啊,是不是我P的有问题。。。
6楼2011-02-16 15:50:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿211 0703化学 346分求调剂 +5 土豆er? 2026-04-09 5/250 2026-04-09 07:48 by yuandd_2001
[考研] 325分化学调剂 +9 15771691647 2026-04-02 9/450 2026-04-08 19:21 by ruoyu867
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +16 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-05 16/800 2026-04-08 16:02 by luoyongfeng
[考研] 22408 266求调剂 +11 masss11222 2026-04-07 14/700 2026-04-08 11:06 by yulian1987
[考研] 调剂 +3 电气300求调剂不 2026-04-08 6/300 2026-04-08 09:39 by 电气300求调剂不
[考研] 283分求调剂 +14 试试看呗 2026-04-04 14/700 2026-04-08 07:03 by lijunpoly
[考研] 一志愿211电子信息347求调剂 +3 554916 2026-04-03 3/150 2026-04-07 23:22 by 如若时光倒流
[考研] 11408 325分 +3 jgtxuxgkx 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:10 by lbsjt
[考研] 080500求调剂 +12 黄宇博 2026-04-06 12/600 2026-04-07 12:41 by upczlm1989
[考研] 一志愿211生物学280分 求调剂 +5 李rien 2026-04-05 5/250 2026-04-06 10:30 by zhyzzh
[考研] 求调剂 +10 Hll胡 2026-04-04 10/500 2026-04-05 20:09 by nepu_uu
[考研] 295求调剂 +8 FZAC123 2026-04-03 8/400 2026-04-05 17:46 by 蓝云思雨
[考研] 316求调剂 +9 墨辰_Orion926 2026-04-04 9/450 2026-04-04 21:35 by lbsjt
[考研] 一志愿东北大学085901土木专硕345求调剂 +3 zxt11111 2026-04-04 3/150 2026-04-04 14:21 by 土木硕士招生
[考研] 一志愿北京科技大学材料工程085601,求调剂 +17 cdyw 2026-04-02 18/900 2026-04-04 11:14 by w_xuqing
[考研] 22408,264求调剂 +3 ywh729 2026-04-03 4/200 2026-04-04 11:04 by ywh729
[考研] 289-求调剂 +4 这里是_ 2026-04-03 4/200 2026-04-03 14:23 by 1753564080
[考研] 11408,284分,二战真诚求调剂 +4 12.27 2026-04-02 4/200 2026-04-03 14:14 by dxiaoxin
[考研] 312求调剂 +6 小小墨123 2026-04-02 7/350 2026-04-03 07:32 by jsw79
[考研] 考研调剂 +3 李木子0120 2026-04-02 5/250 2026-04-02 21:45 by dongzh2009
信息提示
请填处理意见