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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】为什么我的PCR产物总是连接不上T载体
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猫咪胖胖

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】为什么我的PCR产物总是连接不上T载体已有21人参与

我PCR回收得到的片段，与T载体连接后转化摇菌提质粒后可以P出目的条带，但测序总显示是空载体，不知道怎么回事。
PMD-18T和T1-simple都试过。
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1楼2011-02-13 22:23:25
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zhangby2002

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Originally posted by 猫咪胖胖 at 2011-02-13 22:23:25:
我PCR回收得到的片段，与T载体连接后转化摇菌提质粒后可以P出目的条带，但测序总显示是空载体，不知道怎么回事。
PMD-18T和T1-simple都试过。

我和你的问题一样呀~也比较郁闷！我也做啦双酶切鉴定啦
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业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。
18楼2011-03-19 17:31:56
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zhangby2002

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Originally posted by zhangxn2010 at 2011-03-16 23:07:13:
我每次都是先挑菌摇菌做菌液PCR,选择有目的条带的提质粒酶切,然后再选择测序,虽然有点麻烦，但避免了楼主遇到的问题

我和你的程序一样呀，做啦双酶切，用的载体是PMD18-T,送测序公司，说没信号或者出现套峰，结果不好。
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业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。
19楼2011-03-19 17:34:10
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