应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】毕赤酵母胞外表达上清无活性，但胞内测得活性，WHY?
51/1返回列表
查看: 1614  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

belinda227

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】毕赤酵母胞外表达上清无活性，但胞内测得活性，WHY?

我的蛋白是个同源四聚体，每个亚基的分子量为57KD，是胞内酶，AT含量很高，达到60%。选取亚基的片段与pPICZαA构建了重组表达载体，分别电转化SMD-1168和X-33宿主菌。前期经过抗生素梯度抗性筛选，并经PCR验证正确。根据操作手册，用甲醇诱导其表达，在上清液中一直无法测到酶活。破碎菌体后发现在对照菌和重组菌中均能测到活力，且X-33重组菌的活力是其对照菌的2-3倍。
       这是否说明该酶在胞内表达了？因为未加标签，在SDS-PAGE上无法判断那条带是表达了的重组蛋白。但无法分泌到胞外的原因是因为信号肽还是分子量太大？或者其他原因？请各位毕赤酵母表达高手帮我指点迷津，谢谢了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-01-18 16:41:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
dhd997(金币+2): 牛人啊 2011-01-19 09:46:19
belinda227(金币+1): 2011-01-19 19:56:16
酵母表达确实存在有信号肽但是不能分泌表达的现象。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-01-18 23:02:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)
belinda227(金币+2): 2011-01-21 17:42:16
为啥对照菌株也能检测活性捏 什么基因难道 毕赤酵母本身也有
在毕赤酵母中想表达不出胞外蛋白很正常  我以同学也是想做胞外表达  但是做了好长时间都分泌不出来 最后只能胞内表达了  。。。。不过胞内表达没多少意思。。。麻烦啊
赞一下 回复此楼
3楼2011-01-21 00:25:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

belinda227

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2011-01-21 00:25:34:
为啥对照菌株也能检测活性捏 什么基因难道 毕赤酵母本身也有
在毕赤酵母中想表达不出胞外蛋白很正常  我以同学也是想做胞外表达  但是做了好长时间都分泌不出来 最后只能胞内表达了  。。。。不过胞内表达没多少 ...

对 毕赤酵母本身也有的蛋白
赞一下 回复此楼
4楼2011-01-21 17:41:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wyfdgg

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
您好，我想咨询一下您是怎么进行菌体破碎的。我遇到了您这边同样的问题，想看一下是不是蛋白在胞内表达了
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2015-11-18 10:33:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 belinda227 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭