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[交流]
【求助/交流】原核表达，各位高手帮帮忙呀~
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小弟我第一次做表达，做了两个月，最后终于得到了粗壮的蛋白带，可是还没有来得及高兴，发现蛋白大小和我预期的不一样，我的目的蛋白大小是47KD，加上载体蛋白33KD，得到的融合蛋白大小应该是在80左右，可是我的片段大小确显示在40，请帮我分析分析可能的原因！谢啦！！ PS:我用的载体是(PET42A,酶切位点Hind3，XholI)。 |
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accure(金币+4): 谢谢~我引物设计错了，移码了！唉。。。 2011-02-10 19:54:00
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可能的话做个western吧。 1、突变的可能。 2、你可以google一下，网上很多关于42a表达GST标签断裂的问题。 3、如果没有特别的目的，建议你构建28a或32a的表达载体吧。带个HIS或TRX-HIS都可以。或者非融合表达也不错，不过纯化稍微复杂点。 http://a11712.accounting-degrees ... -b117-65-t-15412939 |
3楼2011-01-17 12:26:10
2楼2011-01-17 11:53:21
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